| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第一章 绪论 | 第8-19页 |
| 1.1 β-1,3-葡聚糖概述 | 第8-9页 |
| 1.1.1 β-1,3-葡聚糖 | 第8-9页 |
| 1.1.2 热凝胶 | 第9页 |
| 1.2 β-1,3-葡寡糖 | 第9-12页 |
| 1.2.1 分子结构 | 第9-10页 |
| 1.2.2 生理功能 | 第10-11页 |
| 1.2.3 来源与制备现状 | 第11-12页 |
| 1.2.4 热凝胶寡糖的制备 | 第12页 |
| 1.3 内切β-1,3-葡聚糖酶 | 第12-16页 |
| 1.3.1 β-1,3-葡聚糖酶分类及应用 | 第12-13页 |
| 1.3.2 内切β-1,3-葡聚糖酶的来源 | 第13-14页 |
| 1.3.3 内切β-1,3-葡聚糖酶的生产方法 | 第14页 |
| 1.3.4 微生物生产内切β-1,3-葡聚糖酶 | 第14-16页 |
| 1.4 毕赤酵母表达系统 | 第16-17页 |
| 1.4.1 毕赤酵母概述 | 第16页 |
| 1.4.2 提高酵母表达外源蛋白策略 | 第16-17页 |
| 1.5 立题背景与意义 | 第17-18页 |
| 1.6 本论文主要研究内容 | 第18-19页 |
| 第二章 材料与方法 | 第19-26页 |
| 2.1 主要材料 | 第19-20页 |
| 2.1.1 菌种 | 第19页 |
| 2.1.2 培养基 | 第19-20页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第20页 |
| 2.1.4 主要设备及仪器 | 第20页 |
| 2.2 实验方法 | 第20-24页 |
| 2.2.1 重组毕赤酵母的构建 | 第20-23页 |
| 2.2.2 重组酵母的诱导培养 | 第23页 |
| 2.2.3 BGN13.1基因在毕赤酵母KM71中的表达 | 第23页 |
| 2.2.4 7L发酵罐条件优化发酵 | 第23页 |
| 2.2.5 粗酶液的制备及分离纯化 | 第23页 |
| 2.2.6 酶催化底物热凝胶悬浊液的制备 | 第23-24页 |
| 2.2.7 内切β-1,3-葡聚糖酶活定量测定 | 第24页 |
| 2.3 分析与测定方法 | 第24-26页 |
| 2.3.1 生物量测定 | 第24页 |
| 2.3.2 蛋白含量的测定 | 第24页 |
| 2.3.3 发酵过程中溶氧和pH的测定 | 第24页 |
| 2.3.4 甲醇浓度测定 | 第24页 |
| 2.3.5 山梨醇浓度测定 | 第24页 |
| 2.3.6 β-1,3-葡寡糖定量分析 | 第24页 |
| 2.3.7 β-1,3-葡寡糖定性分析 | 第24-26页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第26-42页 |
| 3.1 毕赤酵母表达载体的构建及验证 | 第26-29页 |
| 3.1.1 pPIC9K-BGN13.1的构建及鉴定 | 第26页 |
| 3.1.2 重组毕赤酵母的筛选、鉴定 | 第26-27页 |
| 3.1.3 重组毕赤酵母表达产物的分析 | 第27-28页 |
| 3.1.4 重组毕赤酵母KM71/pPIC9K-BGN13.1的诱导表达 | 第28-29页 |
| 3.2 摇瓶发酵条件优化 | 第29-37页 |
| 3.2.1 培养基成分的优化 | 第29-30页 |
| 3.2.2 培养条件的优化 | 第30-33页 |
| 3.2.3 正交试验对培养基成分的优化 | 第33-35页 |
| 3.2.4 摇瓶初步研究低温与甲醇/山梨醇混加诱导策略 | 第35页 |
| 3.2.5 毕赤酵母产内切β-1,3-葡聚糖酶7L发酵罐发酵过程 | 第35-36页 |
| 3.2.6 低温(25℃)与甲醇/山梨醇共混组合诱导提高内切β-1,3葡聚糖酶酶活 | 第36-37页 |
| 3.2.7 小结 | 第37页 |
| 3.3 内切β-1,3-葡聚糖酶的性质研究 | 第37-42页 |
| 3.3.1 内切β-1,3-葡聚糖酶最适反应pH和酸碱稳定性 | 第37-38页 |
| 3.3.2 内切β-1,3-葡聚糖酶最适反应温度和热稳定性 | 第38-40页 |
| 3.3.3 金属离子对重组内切β-1,3-葡聚糖酶酶活影响 | 第40页 |
| 3.3.4 重组内切β-1,3葡聚糖酶与热凝胶反应上清液的MALDI-TOF-MS图谱分析 | 第40-42页 |
| 主要结论与展望 | 第42-44页 |
| 主要结论 | 第42-43页 |
| 展望 | 第43-44页 |
| 致谢 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-51页 |
| 附录 作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第51页 |
