| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 0 前言 | 第12-23页 |
| 0.1 近期对 miRNA 的研究 | 第12-17页 |
| 0.1.1 miRNA 的发现 | 第12-14页 |
| 0.1.2 miRNA 调控基因表达 | 第14-16页 |
| 0.1.3 摄食进入体内的 miRNA | 第16-17页 |
| 0.2 鱼糜生产介绍 | 第17-18页 |
| 0.3 T7 RNAP 转录体系与核酸酶 DNAzyme | 第18-21页 |
| 0.3.1 T7 RNAP 转录体系 | 第18-19页 |
| 0.3.2 核酸酶 DNAzyme | 第19-21页 |
| 0.4 食品功能性 miRNA 获取制备的研究意义和实验构想 | 第21-23页 |
| 1 鱼糜漂洗液中 miRNA 的检测 | 第23-34页 |
| 研究背景 | 第23-24页 |
| 1.1 实验材料 | 第24-27页 |
| 1.2 实验方法 | 第27-29页 |
| 1.2.1 改进 SDS - 蛋白酶 K 法 RNA 提取 | 第27-28页 |
| 1.2.2 对新鲜鱼糜漂洗液提取实验 | 第28-29页 |
| 1.2.3 对腐败鱼糜漂洗液提取实验 | 第29页 |
| 1.3 实验结果 | 第29-32页 |
| 1.3.1 改进 SDS - 蛋白酶 K 法 RNA 提取实验结果 | 第29-31页 |
| 1.3.2 新鲜原料提取实验结果 | 第31-32页 |
| 1.3.3 腐败原料提取实验结果 | 第32页 |
| 1.4 讨论 | 第32-33页 |
| 1.5 小结 | 第33-34页 |
| 2 电泳法分离富集小 RN A 技术的建立 | 第34-48页 |
| 研究背景 | 第34-35页 |
| 2.1 实验材料 | 第35-37页 |
| 2.2 实验方法 | 第37-40页 |
| 2.2.1 模拟鱼糜漂洗废液电泳富集实验 | 第37-39页 |
| 2.2.1.1 富集电泳实验 | 第37-38页 |
| 2.2.1.2 检测电泳实验 | 第38-39页 |
| 2.2.2 电泳缓冲液不同浓度实验 | 第39-40页 |
| 2.2.2.1 0.1XTBE 电泳液实验 | 第39页 |
| 2.2.2.2 0.2XTBE 电泳液实验 | 第39页 |
| 2.2.2.3 0.3XTBE 电泳液实验 | 第39-40页 |
| 2.2.2.4 不搅拌，直接取样电泳检测 | 第40页 |
| 2.2.3 拟定 0.2xTBE 电泳液 M168a 内标电泳 | 第40页 |
| 2.2.4 鱼糜漂洗液 +25 μL 100 μM 的 M168 a 内标 | 第40页 |
| 2.3 实验结果 | 第40-46页 |
| 2.3.1 模拟鱼糜漂洗废液电泳富集实验结果 | 第40-42页 |
| 2.3.1.1 富集电泳实验 | 第40-41页 |
| 2.3.1.2 检测电泳实验结果 | 第41-42页 |
| 2.3.2 降低电泳缓冲液离子浓度实验 | 第42-45页 |
| 2.3.2.1 0.1XTBE电泳液实验 | 第42页 |
| 2.3.2.2 0.2XTBE电泳液实验 | 第42-43页 |
| 2.3.2.3 0.3XTBE电泳液实验 | 第43-44页 |
| 2.3.2.4 极富集且不混匀正极体系取样结果(0.2xTBE电泳液) | 第44-45页 |
| 2.3.3 对添加的miRNA(M168a)进行电泳富集实验 | 第45页 |
| 2.3.4 鱼糜漂洗废液电泳富集 | 第45-46页 |
| 2.4 讨论 | 第46-47页 |
| 2.5 小结 | 第47-48页 |
| 3 T7 RNAP转录获得内标小RNA | 第48-77页 |
| 研究背景 | 第48-50页 |
| 本章实验构想 | 第50-52页 |
| a.T7 RNAP转录RNA | 第50-51页 |
| b.对8-17型DNAzyme控制活性实验 | 第51-52页 |
| 3.1 实验材料 | 第52-55页 |
| 3.2 T7 RNA聚合酶转录RNA实验方法 | 第55-63页 |
| 3.2.1 T4 DNA Ligase连接T7 adapter和M168a-primer | 第55-60页 |
| 3.2.1.1 T4 DNA ligase连接反应浓度摸索 | 第56-58页 |
| 3.2.1.2 合适反应物浓度并切胶回收获更多目的链产物 | 第58-60页 |
| 3.2.2 以DNA模板T7 RNA聚合酶体外转录RNA | 第60-63页 |
| 3.2.2.1 T7 RNAP转录RNA,转录不同时间实验(1h 2h 4h 6h) | 第60-61页 |
| 3.2.2.2 大量转录RNA为后续试验准备(以转录反应2h适宜) | 第61-63页 |
| 3.3 对8-17型DNAzyme控制活性实验方法 | 第63-66页 |
| 3.3.1 DZ1-Cir3、DZ1-Ci r2在25℃环化实验(1.0 μM) | 第63-64页 |
| 3.3.2 DNAzyme活性实验检测方法 | 第64-66页 |
| 3.4 DNAzyme对转录产物pre-RNA的切割 | 第66-67页 |
| 3.4.1 DNAzyme切割pre-RNA实验 | 第66页 |
| 3.4.2 DNAzyme切割pre-RNA的电泳检测 | 第66-67页 |
| 3.5 实验结果 | 第67-75页 |
| 3.5.1 T4 DNA连接酶连接实验结果 | 第67-69页 |
| 3.5.1.1 在25℃下T4 DNA连接酶连接反应浓度摸索实验结果 | 第68-69页 |
| 3.5.1.2 合适的初始反应物浓度并切胶回收获更多目的链产物 | 第69页 |
| 3.5.2 T7RNAP转录RNA实验结果 | 第69-72页 |
| 3.5.2.1 转录反应1h、2h、4h、6h结果 | 第70-71页 |
| 3.5.2.2 大量转录RNA为后续试验准备(以转录反应2h适宜) | 第71-72页 |
| 3.5.3 对8-17型DNAzyme控制活性实验结果 | 第72-74页 |
| 3.5.3.1 DZ1-Cir2、DZ1-Cir3在25℃环化实验结果(1.0 μM) | 第72-73页 |
| 3.5.3.2 环状DNAzyme(DZ1-Cir2、DZ1-Ci r3)对DZ1-s切割反应结果 | 第73-74页 |
| 3.5.4 DNAzyme对pre-RNA的切割结果 | 第74-75页 |
| 3.6 讨论 | 第75-76页 |
| 3.7 小结 | 第76-77页 |
| 4 总结 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-85页 |
| 附录 | 第85-86页 |
| 致谢 | 第86-87页 |
| 个人简历 | 第87-88页 |
