| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 主要英文缩略表 | 第7-11页 |
| 1 前言 | 第11-19页 |
| 1.1 他达那非简介及其危害 | 第11-13页 |
| 1.2 他达那非等 PDE-5 抑制剂残留现状 | 第13页 |
| 1.3 他达那非类药物检测方法研究现状 | 第13-16页 |
| 1.3.1 薄层层析色谱法 | 第13-14页 |
| 1.3.2 高效液相色谱法 | 第14页 |
| 1.3.3 色谱--质谱联用法 | 第14-15页 |
| 1.3.4 核磁共振法 | 第15页 |
| 1.3.5 毛细管电泳 | 第15-16页 |
| 1.4 免疫分析方法 | 第16-17页 |
| 1.5 本研究的目的意义、内容及技术路线 | 第17-19页 |
| 1.5.1 研究的目的意义及主要内容 | 第17-18页 |
| 1.5.2 研究技术路线图 | 第18-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-32页 |
| 2.1 实验材料 | 第19-22页 |
| 2.1.1 主要仪器设备 | 第19-20页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第20页 |
| 2.1.3 主要溶液 | 第20-22页 |
| 2.2 试验方法 | 第22-25页 |
| 2.2.1 半抗原的合成 | 第22页 |
| 2.2.2 半抗原的结构鉴定 | 第22页 |
| 2.2.3 半抗原与载体蛋白的偶联及鉴定 | 第22-23页 |
| 2.2.4 三硝基苯磺酸（TNBS）法测定偶联物偶联比 | 第23-24页 |
| 2.2.5 动物免疫 | 第24页 |
| 2.2.6 抗血清质量的测定 | 第24-25页 |
| 2.2.7 抗血清的纯化 | 第25页 |
| 2.3 间接酶联免疫分析方法的建立 | 第25-28页 |
| 2.3.1 ic-ELISA基本步骤 | 第25-26页 |
| 2.3.2 ic-ELISA工作条件优化 | 第26-27页 |
| 2.3.3 ic-ELISA标准曲线的建立 | 第27页 |
| 2.3.4 方法特异性 | 第27-28页 |
| 2.3.5 样品前处理及基质干扰的消除 | 第28页 |
| 2.3.6 实际样品检测 | 第28页 |
| 2.3.7 与HPLC-MS/MS结果对比 | 第28页 |
| 2.4 胶体金免疫层析试纸条的制备 | 第28-32页 |
| 2.4.1 胶体金制备 | 第28-29页 |
| 2.4.2 抗体及包被原的选择 | 第29页 |
| 2.4.3 胶体金标记步骤优化 | 第29-30页 |
| 2.4.4 金标抗体和检测线包被抗原的稀释倍数棋盘优化 | 第30页 |
| 2.4.5 样品垫膜材的优化 | 第30页 |
| 2.4.6 样品垫处理液的优化 | 第30页 |
| 2.4.7 药物稀释液的优化 | 第30页 |
| 2.4.8 药物稀释液中甲醇含量的优化 | 第30-31页 |
| 2.4.9 质控线二抗的稀释倍数优化 | 第31页 |
| 2.4.10 试纸条的组装 | 第31页 |
| 2.4.11 试纸条的测试及结果判定 | 第31-32页 |
| 2.4.12 GICA标准曲线的建立 | 第32页 |
| 2.4.13 方法的特异性 | 第32页 |
| 2.4.14 实际样品检测 | 第32页 |
| 2.4.15 与HPLC-MS/MS结果对比 | 第32页 |
| 3 结果与分析 | 第32-68页 |
| 3.0 半抗原的设计 | 第32-33页 |
| 3.1 半抗原合成及结构鉴定 | 第33-36页 |
| 3.2 人工抗原的合成与鉴定 | 第36-37页 |
| 3.3 人工抗原偶联比的测定 | 第37-38页 |
| 3.4 抗血清的评价 | 第38-39页 |
| 3.5 基于抗体PAb-H5-Am TD-MA建立ic-ELISA方法 | 第39-51页 |
| 3.5.1 包被原的选择 | 第39-40页 |
| 3.5.2 工作条件优化 | 第40-45页 |
| 3.5.3 ic-ELISA标准曲线的建立 | 第45-46页 |
| 3.5.4 方法的特异性评价 | 第46-47页 |
| 3.5.5 样品前处理及基质干扰的消除 | 第47-48页 |
| 3.5.6 实际样品检测 | 第48-51页 |
| 3.6 胶体金免疫层析试纸条的制备 | 第51-68页 |
| 3.6.1 胶体金质量鉴定 | 第51-52页 |
| 3.6.2 抗体及包被原的选择 | 第52页 |
| 3.6.3 胶体金标记步骤优化 | 第52-55页 |
| 3.6.4 金标抗体和检测线包被抗原的稀释倍数棋盘优化 | 第55-56页 |
| 3.6.5 样品垫材质的优化 | 第56-57页 |
| 3.6.6 样品垫处理液的优化 | 第57-58页 |
| 3.6.7 药物稀释液的优化 | 第58-59页 |
| 3.6.8 药物稀释液中甲醇含量的优化 | 第59-60页 |
| 3.6.9 质控线二抗的稀释倍数优化 | 第60-61页 |
| 3.6.10 GICA标准曲线的建立 | 第61-62页 |
| 3.6.11 方法的特异性 | 第62-63页 |
| 3.6.12 实际样品检测 | 第63-68页 |
| 4 讨论与结论 | 第68-72页 |
| 4.1 讨论 | 第68-69页 |
| 4.1.1 半抗原的设计与合成 | 第68页 |
| 4.1.2 理化因素对免疫分析方法的影响 | 第68-69页 |
| 4.1.3 样品前处理 | 第69页 |
| 4.1.4 样品垫膜材质及其处理液的影响 | 第69页 |
| 4.2 结论 | 第69-70页 |
| 4.3 创新点 | 第70页 |
| 4.4 展望 | 第70-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-80页 |
| 附录A 作者攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第80-81页 |
| 附录B 本研究所涉及的他达那非功能及结构类似物结构信息 | 第81-82页 |
| 附录C 他达那非半抗原结构鉴定质谱图及核磁图 | 第82-89页 |
