| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-6页 |
| 目录 | 第6-9页 |
| 第一章 绪论 | 第9-17页 |
| ·碱性蛋白酶的概述 | 第9页 |
| ·蛋白酶的分类 | 第9页 |
| ·碱性蛋白酶的性质 | 第9页 |
| ·碱性蛋白酶的应用 | 第9-12页 |
| ·碱性蛋白酶在洗涤剂中的应用 | 第10页 |
| ·碱性蛋白酶在食品及饲料工业中的应用 | 第10-11页 |
| ·碱性蛋白酶在皮革工业中的应用 | 第11页 |
| ·碱性蛋白酶在医药行业中的应用 | 第11页 |
| ·碱性蛋白酶在污水回收中的应用 | 第11页 |
| ·碱性蛋白酶废弃银回收的的应用 | 第11-12页 |
| ·微生物碱性蛋白酶的研究进展 | 第12-14页 |
| ·碱性蛋白酶的主要生产菌株 | 第12页 |
| ·碱性蛋白酶生产菌株选育及发酵优化的国内外研究进展 | 第12-14页 |
| ·芽孢杆菌的表达系统 | 第14-16页 |
| ·枯草芽孢杆菌 | 第14-15页 |
| ·解淀粉芽孢杆菌 | 第15页 |
| ·地衣芽孢杆菌 | 第15-16页 |
| ·本研究立题依据和研究内容 | 第16-17页 |
| ·立题依据 | 第16页 |
| ·研究内容 | 第16-17页 |
| 第二章 材料与方法 | 第17-27页 |
| ·实验材料及实验仪器 | 第17-20页 |
| ·菌株和质粒来源 | 第17页 |
| ·工具酶和试剂 | 第17页 |
| ·常用溶液的配制 | 第17-18页 |
| ·培养基及其培养条件 | 第18-19页 |
| ·主要仪器 | 第19-20页 |
| ·实验方法与步骤 | 第20-27页 |
| ·地衣芽孢杆菌染色体 DNA 的提取 | 第20页 |
| ·引物设计及其 PCR 扩增 | 第20-21页 |
| ·芽孢杆菌质粒的提取方法 | 第21-22页 |
| ·枯草芽孢杆菌 WB600 的感受态制备及转化步骤 | 第22页 |
| ·解淀粉芽孢杆菌的感受态细胞的制备及转化 | 第22页 |
| ·地衣芽孢杆菌原生质体的制备及其转化 | 第22-23页 |
| ·碱性蛋白酶活力测定方法 | 第23-24页 |
| ·L-酪氨酸标准曲线的绘制 | 第24页 |
| ·碱性蛋白酶的酶学性质的分析方法 | 第24-25页 |
| ·质粒 pLY-apr 稳定性分析的方法 | 第25-27页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第27-50页 |
| ·碱性蛋白酶基因 apr 在枯草芽孢杆菌中的表达与功能鉴定 | 第27-31页 |
| ·地衣芽孢杆菌碱性蛋白酶基因的克隆 | 第27页 |
| ·重组质粒 pLY-apr 的构建 | 第27-29页 |
| ·apr 基因的功能鉴定及序列分析 | 第29页 |
| ·碱性蛋白酶在重组 B. subtilis WB600/pLY-apr 中分泌表达 | 第29-31页 |
| ·碱性蛋白酶快速发酵重组菌的构建与发酵性能研究 | 第31-35页 |
| ·重组 B. amyloliquefaciens B4803/pLY-apr 的构建 | 第31-33页 |
| ·重组菌 B. amyloliquefaciens B4803/pLY-apr 碱性蛋白酶发酵性能 | 第33页 |
| ·重组质粒 pLY-apr 在解淀粉芽孢杆菌 B4803 中的稳定性测定 | 第33-34页 |
| ·B. amyloliquefaciens B4803/pLY-apr 在 25 L 发酵罐上产酶 | 第34-35页 |
| ·高产碱性蛋白酶重组地衣芽孢杆菌的构建 | 第35-36页 |
| ·B. licheniformis B5102/pLY-apr 的构建 | 第35页 |
| ·重组质粒 pLY-apr 在 B. licheniformis B5102 中的稳定性 | 第35页 |
| ·B. licheniformis B5102/pLY-apr 在 25 L 发酵罐产酶曲线 | 第35-36页 |
| ·构建重组菌的产酶水平比较 | 第36页 |
| ·B. licheniformis B5102/pLY-apr 产碱性蛋白酶的发酵工艺优化 | 第36-46页 |
| ·种子的优化 | 第37-38页 |
| ·碳源优化对 B. licheniformis B5102/pLY-apr 产碱性蛋白酶的影响 | 第38-40页 |
| ·有机氮源优化对 B. licheniformis B5102/pLY-apr 产碱性蛋白酶的影响 | 第40-41页 |
| ·无机氮源的优化对 B. licheniformis B5102/pLY-apr 产碱性蛋白酶的影响 | 第41-42页 |
| ·磷酸盐浓度对发酵产酶的影响 | 第42-43页 |
| ·发酵优化的正交试验 | 第43页 |
| ·B. licheniformis B5102/pLY-apr 发酵培养条件的确定 | 第43-44页 |
| ·B. licheniformis B5102/pLY-apr 的产酶进程测定 | 第44-45页 |
| ·B. licheniformis B5102/pLY-apr 在发酵罐上产酶曲线分析 | 第45-46页 |
| ·重组碱性蛋白酶酶学性质 | 第46-50页 |
| ·重组碱性蛋白酶的最适温度及温度稳定性的分析 | 第46-47页 |
| ·重组酶的最适 pH 及其 pH 稳定性 | 第47-48页 |
| ·金属离子对重组碱性蛋白酶酶活的作用 | 第48-50页 |
| 主要结论 | 第50-51页 |
| 展望 | 第51-52页 |
| 致谢 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-56页 |
| 附录 | 第56页 |
