| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第一章 绪论 | 第8-13页 |
| 1.1 丙酮酸的性质与用途 | 第8页 |
| 1.2 丙酮酸的制备方法 | 第8-10页 |
| 1.2.1 化学合成法 | 第8-9页 |
| 1.2.2 生物技术法 | 第9-10页 |
| 1.3 L-氨基酸脱氨酶 | 第10-11页 |
| 1.3.1 L-氨基酸脱氨酶来源 | 第10页 |
| 1.3.2 L-氨基酸脱氨酶催化机理及功能 | 第10页 |
| 1.3.3 L-氨基酸脱氨酶晶体结构 | 第10-11页 |
| 1.3.4 L-氨基酸脱氨酶与细胞色素b | 第11页 |
| 1.3.5 L-氨基酸脱氨酶应用 | 第11页 |
| 1.4 立题依据 | 第11-12页 |
| 1.5 研究内容 | 第12-13页 |
| 第二章 材料与方法 | 第13-22页 |
| 2.1 材料 | 第13-16页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第13-14页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第14页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第14-15页 |
| 2.1.4 主要溶液 | 第15页 |
| 2.1.5 培养基 | 第15-16页 |
| 2.2 方法 | 第16-22页 |
| 2.2.1 分子操作 | 第16页 |
| 2.2.2 E.coli重组菌构建 | 第16-17页 |
| 2.2.3 全细胞催化剂的制备 | 第17页 |
| 2.2.4 全细胞催化L-丙氨酸合成丙酮酸 | 第17页 |
| 2.2.5 重组E.coli发酵条件优化 | 第17-18页 |
| 2.2.6 全细胞催化条件优化 | 第18页 |
| 2.2.7 饱和突变位点的选择、突变建库及高通量筛选 | 第18-19页 |
| 2.2.8 膜蛋白提取和酶学性质测量 | 第19页 |
| 2.2.9 3LNBS发酵罐上优化实验 | 第19-20页 |
| 2.2.10 分析方法 | 第20-22页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第22-42页 |
| 3.1 pm1生产菌株的构建 | 第22-27页 |
| 3.1.1 pm1的克隆及表达 | 第22-23页 |
| 3.1.2 催化条件优化 | 第23-26页 |
| 3.1.3 发酵条件优化 | 第26-27页 |
| 3.2 表达细胞色素b提高重组菌催化合成丙酮酸能力 | 第27-31页 |
| 3.2.1 cybC的克隆与表达 | 第28-29页 |
| 3.2.2 表达cybC和pm1重组菌发酵诱导时间优化 | 第29-30页 |
| 3.2.3 表达cybC对催化合成丙酮酸的影响 | 第30-31页 |
| 3.3 分子改造pm1提高重组菌催化合成丙酮酸的能力 | 第31-37页 |
| 3.3.1 pm1同源模型选择 | 第31-32页 |
| 3.3.2 丙氨酸替换法验证关键氨基酸 | 第32-33页 |
| 3.3.3 饱和突变位点的选择 | 第33-35页 |
| 3.3.4 饱和突变、筛选及验证 | 第35-36页 |
| 3.3.5 突变体酶学性质分析 | 第36-37页 |
| 3.4 3LNBS发酵罐中条件优化 | 第37-42页 |
| 3.4.1 不同时期诱导对产酶影响 | 第37-38页 |
| 3.4.2 不同搅拌转速及通气量对诱导产酶影响 | 第38-39页 |
| 3.4.3 不同底物加入方式对催化合成丙酮酸的影响 | 第39-40页 |
| 3.4.4 分阶段控制通气量对合成丙酮酸影响 | 第40-42页 |
| 主要结论与展望 | 第42-44页 |
| 主要结论 | 第42页 |
| 展望 | 第42-44页 |
| 致谢 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-49页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第49页 |
