| 摘要 | 第4-5页 |
| abstract | 第5页 |
| 引言 | 第8-10页 |
| 第一章 鱼体内蛋白酶的异源表达研究现状 | 第10-19页 |
| 1.1 鱼体内的蛋白酶 | 第10-15页 |
| 1.1.1 组织蛋白酶 | 第11-13页 |
| 1.1.2 钙蛋白酶 | 第13-14页 |
| 1.1.3 金属蛋白酶 | 第14-15页 |
| 1.2 鱼体内蛋白酶的异源表达 | 第15-17页 |
| 1.3 鱼体内蛋白酶的异源表达的研究现状 | 第17页 |
| 1.4 课题立题依据和主要研究内容 | 第17-19页 |
| 第二章 红鳍东方鲀组织蛋白酶B、L序列分析 | 第19-34页 |
| 2.1 所用网站及数据库 | 第19页 |
| 2.2 实验方法 | 第19页 |
| 2.3 结果与分析 | 第19-33页 |
| 2.3.1 红鳍东方鲀组织蛋白酶B、L序列分析 | 第19-25页 |
| 2.3.2 红鳍东方鲀组织蛋白酶B、L二级结构分析 | 第25-31页 |
| 2.3.3 红鳍东方鲀组织蛋白酶B、L三级结构模拟 | 第31-33页 |
| 2.4 本章小结 | 第33-34页 |
| 第三章 红鳍东方鲀组织蛋白酶B、L质粒的构建及表达 | 第34-45页 |
| 3.1 实验材料与仪器设备 | 第34页 |
| 3.1.1 材料与试剂 | 第34页 |
| 3.1.2 仪器和设备 | 第34页 |
| 3.2 实验方法 | 第34-37页 |
| 3.2.1 引物设计 | 第34页 |
| 3.2.2 红鳍东方鲀总RNA的提取 | 第34-35页 |
| 3.2.3 cDNA的合成及红鳍东方鲀组织蛋白酶B、L基因扩增 | 第35-36页 |
| 3.2.4 红鳍东方鲀组织蛋白酶B、L重组质粒的构建 | 第36页 |
| 3.2.5 红鳍东方鲀组织蛋白酶B、L重组质粒的鉴定 | 第36-37页 |
| 3.2.6 红鳍东方鲀组织蛋白酶B、L重组质粒的转化 | 第37页 |
| 3.2.7 重组工程菌的构建及表达 | 第37页 |
| 3.2.8 SDS-PAGE检测重组蛋白酶 | 第37页 |
| 3.3 结果与分析 | 第37-44页 |
| 3.3.1 引物设计 | 第37-38页 |
| 3.3.2 RNA提取浓度 | 第38-39页 |
| 3.3.3 红鳍东方鲀组织蛋白酶B、L基因序列的扩增 | 第39页 |
| 3.3.4 重组质粒的鉴定 | 第39-40页 |
| 3.3.5 重组质粒的构建及鉴定 | 第40-42页 |
| 3.3.6 重组质粒的鉴定 | 第42页 |
| 3.3.7 SDS-PAGE检测重组蛋白 | 第42-44页 |
| 3.4 本章小结 | 第44-45页 |
| 第四章 重组红鳍东方鲀组织蛋白酶B、L粗酶液纯化及性质分析 | 第45-51页 |
| 4.1 实验材料与仪器设备 | 第45页 |
| 4.1.1 主要试剂及药品 | 第45页 |
| 4.1.2 仪器和设备 | 第45页 |
| 4.2 实验方法 | 第45-46页 |
| 4.2.1 重组组织蛋白酶粗酶液最适温度及温度稳定性 | 第45-46页 |
| 4.2.2 重组组织蛋白酶粗酶液最适pH及pH稳定性 | 第46页 |
| 4.2.3 重组组织蛋白酶His-tag纯化 | 第46页 |
| 4.2.4 重组组织蛋白酶离子交换柱纯化 | 第46页 |
| 4.2.5 重组组织蛋白酶硫酸铵沉淀纯化 | 第46页 |
| 4.3 结果与分析 | 第46-50页 |
| 4.3.1 重组组织蛋白酶粗酶液最适温度及温度稳定性 | 第46-47页 |
| 4.3.2 重组组织蛋白酶最适pH及pH稳定性 | 第47-48页 |
| 4.3.3 重组组织蛋白酶His-tag纯化 | 第48-49页 |
| 4.3.4 重组组织蛋白酶离子交换柱纯化 | 第49-50页 |
| 4.3.5 重组组织蛋白酶硫酸铵纯化 | 第50页 |
| 4.4 本章小结 | 第50-51页 |
| 第五章 总结与展望 | 第51-53页 |
| 5.1 结论 | 第51-52页 |
| 5.2 展望 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-57页 |
| 附录 攻读硕士学位期间取得科研成果 | 第57-58页 |
| 致谢 | 第58页 |
