| 摘要 | 第3-5页 |
| abstract | 第5-6页 |
| 第一章 引言 | 第13-22页 |
| 1.1 研究背景 | 第13-14页 |
| 1.1.1 食品安全与食源性致病菌 | 第13页 |
| 1.1.2 食源性致病菌的危害 | 第13-14页 |
| 1.2 常见的几种活菌检测技术 | 第14-17页 |
| 1.2.1 传统培养法 | 第14页 |
| 1.2.2 基于mRNA的RT-PCR技术 | 第14-15页 |
| 1.2.3 流式细胞术 | 第15-16页 |
| 1.2.4 ATP生物发光法 | 第16-17页 |
| 1.3 qPCR技术 | 第17-19页 |
| 1.3.1 qPCR技术的原理 | 第17页 |
| 1.3.2 qPCR技术的分类 | 第17-19页 |
| 1.4 PMA的作用机理及其研究现状 | 第19-20页 |
| 1.4.1 PMA用于活菌检测的作用机理 | 第19-20页 |
| 1.4.2 PMA在食源性致病菌活菌检测中的应用 | 第20页 |
| 1.5 研究内容 | 第20-21页 |
| 1.6 目的与意义 | 第21-22页 |
| 第二章 PMA-qPCR用于快速定量检测牛奶中的产呕吐毒素蜡样芽胞杆菌 | 第22-34页 |
| 2.1 前言 | 第22-23页 |
| 2.2 材料与仪器 | 第23-25页 |
| 2.2.1 实验菌株 | 第23-24页 |
| 2.2.2 实验试剂 | 第24页 |
| 2.2.3 实验仪器和设备 | 第24页 |
| 2.2.4 实验相关试剂和培养基的配制 | 第24-25页 |
| 2.3 实验方法 | 第25-29页 |
| 2.3.1 引物的设计与合成 | 第25页 |
| 2.3.2 细菌的培养和计数 | 第25页 |
| 2.3.3 细菌DNA的提取 | 第25-26页 |
| 2.3.4 qPCR反应 | 第26页 |
| 2.3.5 PMA对细菌的处理 | 第26-27页 |
| 2.3.6 纯菌液中标准曲线的建立 | 第27页 |
| 2.3.7 牛奶加标样中标准曲线的建立 | 第27-28页 |
| 2.3.8 PMA-qPCR在牛奶加标样中的特异性分析 | 第28-29页 |
| 2.3.9 统计学分析 | 第29页 |
| 2.4 实验结果 | 第29-33页 |
| 2.4.1 PMA浓度的优化 | 第29页 |
| 2.4.2 PMA效果的验证 | 第29-31页 |
| 2.4.3 PMA-qPCR在纯菌液和牛奶加标样中的检测限的确定 | 第31-32页 |
| 2.4.4 PMA-qPCR在牛奶加标样中特异性的确定 | 第32-33页 |
| 2.5 讨论与分析 | 第33页 |
| 2.6 小结 | 第33-34页 |
| 第三章 PMA-qPCR用于快速定量检测牛奶中的大肠杆菌O157:H7和金黄色葡萄球菌 | 第34-47页 |
| 3.1 前言 | 第34-35页 |
| 3.2 材料与仪器 | 第35-37页 |
| 3.2.1 实验菌株 | 第35-36页 |
| 3.2.2 实验试剂 | 第36页 |
| 3.2.3 实验仪器和设备 | 第36-37页 |
| 3.2.4 实验相关试剂和培养基的配制 | 第37页 |
| 3.3 实验方法 | 第37-41页 |
| 3.3.1 引物和的设计与合成 | 第37页 |
| 3.3.2 细菌的培养和计数 | 第37页 |
| 3.3.3 细菌DNA的提取 | 第37页 |
| 3.3.4 qPCR反应 | 第37-39页 |
| 3.3.5 PMA对细菌的处理 | 第39页 |
| 3.3.6 纯菌液中标准曲线的建立 | 第39-40页 |
| 3.3.7 牛奶加标样中标准曲线的建立 | 第40-41页 |
| 3.3.8 统计学分析 | 第41页 |
| 3.4 实验结果 | 第41-45页 |
| 3.4.1 PMA浓度的优化 | 第41-42页 |
| 3.4.2 PMA效果的验证 | 第42-43页 |
| 3.4.3 纯菌液中的检测限的确定 | 第43-44页 |
| 3.4.4 牛奶加标样中的检测限的确定 | 第44-45页 |
| 3.5 讨论与分析 | 第45页 |
| 3.6 小结 | 第45-47页 |
| 第四章 SD-PMA-mqPCR用于牛奶中活的大肠杆菌O157:H7、克罗诺杆菌和沙门氏菌同时定量检测 | 第47-66页 |
| 4.1 前言 | 第47-48页 |
| 4.2 材料与仪器 | 第48-49页 |
| 4.2.1 实验菌株 | 第48-49页 |
| 4.2.2 实验试剂 | 第49页 |
| 4.2.3 实验仪器和设备 | 第49页 |
| 4.2.4 实验相关试剂和培养基的配制 | 第49页 |
| 4.3 实验方法 | 第49-55页 |
| 4.3.1 引物和探针的设计与合成 | 第49-50页 |
| 4.3.2 细菌的培养和计数 | 第50页 |
| 4.3.3 三种死菌的制备 | 第50页 |
| 4.3.4 细菌DNA的提取 | 第50页 |
| 4.3.5 qPCR反应 | 第50-52页 |
| 4.3.6 SD处理浓度的优化 | 第52页 |
| 4.3.7 PMA对细菌的处理 | 第52-53页 |
| 4.3.8 纯菌液和牛奶加标样中标准曲线的建立 | 第53-54页 |
| 4.3.9 SD-PMA-mqPCR对活菌的回收率 | 第54-55页 |
| 4.3.10 统计学分析 | 第55页 |
| 4.4 结果 | 第55-65页 |
| 4.4.1 引物和探针的验证 | 第55-56页 |
| 4.4.2 SD浓度的优化 | 第56-58页 |
| 4.4.3 PMA浓度的优化 | 第58-59页 |
| 4.4.4 PMA效果的验证 | 第59-61页 |
| 4.4.6 纯菌液中标准曲线的确定 | 第61-63页 |
| 4.4.7 牛奶加标样中标准曲线的确定 | 第63-64页 |
| 4.4.8 SD-PMA-mqPCR的回收率 | 第64页 |
| 4.4.9 mqPCR特异性验证 | 第64-65页 |
| 4.5 讨论与分析 | 第65页 |
| 4.6 小结 | 第65-66页 |
| 第五章 结论与展望 | 第66-68页 |
| 5.1 结论 | 第66-67页 |
| 5.1.1 基于PMA-qPCR的活菌检测方法可用于检测牛奶中的产呕吐毒素蜡样芽胞杆菌 | 第66页 |
| 5.1.2 PMA-qPCR可分别用于定量检测牛奶中的大肠杆菌O157:H7和金黄色葡萄球菌 | 第66页 |
| 5.1.3 基于SD-PMA-mqPCR的活菌检测方法可用于同时定量检测牛奶中的大肠杆菌O157:H7、克罗诺杆菌和沙门氏菌 | 第66-67页 |
| 5.2 展望 | 第67-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-76页 |
| 附录A 试剂 | 第76-77页 |
| 附录B 实验仪器与设备 | 第77-78页 |
| 个人简介 | 第78页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第78页 |
