| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-11页 |
| 第1章 前言 | 第11-21页 |
| ·深海微生物简介 | 第11页 |
| ·龙须菜 | 第11-13页 |
| ·海藻寡糖 | 第13-17页 |
| ·海藻寡糖的简介 | 第13-15页 |
| ·海藻寡糖的制备方法 | 第15-17页 |
| ·硫酸酯酶 | 第17-19页 |
| ·硫酸酯酶简介 | 第17页 |
| ·硫酸酯酶的来源 | 第17-18页 |
| ·硫酸酯酶的应用 | 第18-19页 |
| ·本论文的研究背景、目的和意义 | 第19-21页 |
| 第2章 材料与方法 | 第21-40页 |
| ·材料 | 第21-26页 |
| ·样品及前处理 | 第21页 |
| ·菌株和质粒 | 第21页 |
| ·引物 | 第21页 |
| ·主要试剂 | 第21-22页 |
| ·培养基 | 第22-23页 |
| ·常用溶液 | 第23-25页 |
| ·主要仪器设备 | 第25-26页 |
| ·主要分析软件 | 第26页 |
| ·基本方法 | 第26-32页 |
| ·细菌基因组 DNA 提取 | 第26-27页 |
| ·PCR 反应 | 第27页 |
| ·感受态细胞的制备(化学转化法) | 第27-28页 |
| ·连接反应 | 第28页 |
| ·质粒的化学转化 | 第28页 |
| ·菌落 PCR | 第28页 |
| ·质粒提取 | 第28-29页 |
| ·限制性内切酶酶切反应 | 第29页 |
| ·从凝胶上回收 DNA | 第29页 |
| ·SDS-PAGE 凝胶电泳 | 第29-30页 |
| ·龙须菜粉碎方法 | 第30页 |
| ·酶解方法 | 第30页 |
| ·菌体量的测定方法 | 第30页 |
| ·DNS 法测定还原糖的含量 | 第30-31页 |
| ·苯酚-硫酸法测定总糖含量 | 第31-32页 |
| ·单因素优化 Flammeovirga pacifica 菌株酶解龙须菜产糖的条件 | 第32-34页 |
| ·Flammeovirga pacifica 菌株种子生长曲线及种龄的确定 | 第32页 |
| ·酶解条件的优化 | 第32-33页 |
| ·培养基的优化 | 第33-34页 |
| ·响应面实验优化 Flammeovirga pacifica 菌株酶解龙须菜产糖的条件 | 第34-35页 |
| ·实验设计方法 | 第34页 |
| ·PB 实验设计 | 第34页 |
| ·最陡爬坡实验设计 | 第34-35页 |
| ·中心组合实验设计 | 第35页 |
| ·验证实验 | 第35页 |
| ·5L 酶解罐扩大培养 | 第35页 |
| ·芳香基硫酸酯酶基因 ary1671 的克隆表达 | 第35-40页 |
| ·Flammeovirga pacifica 全基因组序列分析及芳香基硫酸酯酶基因的分析比对 | 第35页 |
| ·芳香基硫酸酯酶基因 ary1671 表达引物的设计 | 第35-36页 |
| ·芳香基硫酸酯酶基因 ary1671 的克隆，测序 | 第36-38页 |
| ·芳香基硫酸酯酶基因 ary1671 的诱导表达 | 第38-39页 |
| ·目的蛋白的 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第39-40页 |
| 第3章 结果与分析 | 第40-64页 |
| ·Flammeovirga pacifica 菌株种子生长曲线及种龄的确定 | 第40页 |
| ·单因素实验优化 Flammeovirga pacifica 菌株酶解龙须菜产糖的条件 | 第40-49页 |
| ·酶解时间对产糖的影响 | 第40-41页 |
| ·酶解温度对产糖的影响 | 第41-42页 |
| ·起始 pH 对产糖的影响 | 第42-43页 |
| ·接种量对产糖的影响 | 第43页 |
| ·装液量对产糖的影响 | 第43-44页 |
| ·龙须菜浓度对产糖的影响 | 第44-45页 |
| ·氮源对产糖的影响 | 第45页 |
| ·蛋白胨浓度对产糖的影响 | 第45-46页 |
| ·盐对产糖的影响 | 第46-47页 |
| ·KCl 浓度对产糖的影响 | 第47页 |
| ·金属离子对产糖的影响 | 第47-48页 |
| ·Ca~(2+)浓度对产糖的影响 | 第48-49页 |
| ·响应面实验优化 Flammeovirga pacifica 菌株酶解龙须菜产糖的条件 | 第49-56页 |
| ·PB 实验设计筛选显著因素 | 第49-51页 |
| ·最陡爬坡实验结果 | 第51-52页 |
| ·中心组合实验结果 | 第52-54页 |
| ·关键因素对 Flammeovirga pacifica 酶解龙须菜产糖的响应面分析和优化条件的确定 | 第54-56页 |
| ·回归方程的验证 | 第56页 |
| ·5 L 酶解罐扩大培养 | 第56-57页 |
| ·芳香基硫酸酯酶基因 ary1671 的克隆表达 | 第57-64页 |
| ·Flammeovirga pacifica 全基因组序列分析及芳香基硫酸酯酶基因的查找 | 第57-59页 |
| ·芳香基硫酸酯酶基因 ary1671 的序列比对与分析 | 第59-61页 |
| ·芳香基硫酸酯酶 ary1671 基因的 PCR 扩增和纯化 | 第61页 |
| ·芳香基硫酸酯酶重组质粒 pCold Ι-ary1671 的构建 | 第61页 |
| ·重组质粒双酶切验证后测序 | 第61-62页 |
| ·测序结果分析 | 第62页 |
| ·芳香基硫酸酯酶基因 ary1671 的诱导表达 | 第62-64页 |
| 第4章 讨论与总结 | 第64-69页 |
| ·单因素实验优化菌株 Flammeovirga pacifica 酶解龙须菜产糖的条件 | 第64页 |
| ·响应面实验优化菌株 Flammeovirga pacifica 酶解龙须菜产糖的条件 | 第64-65页 |
| ·芳香基硫酸酯酶的克隆表达 | 第65-69页 |
| 第5章 展望 | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-76页 |
