甘油单-二酰酯脂肪酶基因的克隆和表达
第一章 文献综述 | 第1-27页 |
·脂肪酶简介 | 第10页 |
·脂肪酶的微生物生产 | 第10-14页 |
·脂肪酶产生菌 | 第10-12页 |
·产脂肪酶菌种的选育 | 第12页 |
·产脂肪酶微生物的筛选 | 第12-13页 |
·利用微生物发酵生产脂肪酶 | 第13-14页 |
·脂肪酶的结构与催化机理 | 第14-16页 |
·脂肪酶作用的底物特异性 | 第16-17页 |
·脂肪酸特异性 | 第16页 |
·位置特异性 | 第16页 |
·立体结构特异性 | 第16-17页 |
·脂肪酶活力的测定 | 第17-18页 |
·定量法 | 第17页 |
·定性法 | 第17-18页 |
·脂肪酶的固定化 | 第18页 |
·脂肪酶的蛋白质工程改造 | 第18-21页 |
·理性设计 | 第18-19页 |
·定向进化 | 第19-21页 |
·脂肪酶的应用 | 第21-25页 |
·生产单甘酯 | 第21-22页 |
·皮革生产 | 第22-23页 |
·加酶洗涤剂 | 第23页 |
·食品工业的应用 | 第23页 |
·利用脂肪酶拆分手性化合物 | 第23-24页 |
·油脂改性 | 第24页 |
·环境污染治理 | 第24-25页 |
·小结 | 第25-27页 |
第二章 甘油单-二酰酯脂肪酶基因的克隆与序列分析 | 第27-43页 |
·前言 | 第27页 |
·实验材料 | 第27-29页 |
·菌种 | 第27页 |
·质粒 | 第27页 |
·工具酶 | 第27-28页 |
·化学药品及试剂盒 | 第28页 |
·PCR引物 | 第28页 |
·主要仪器 | 第28-29页 |
·培养基 | 第29页 |
·实验方法 | 第29-34页 |
·碱裂解法微量制备质粒DNA | 第29-30页 |
·CaCl2法制备大肠杆菌感受态细胞 | 第30页 |
·质粒DNA的转化 | 第30-31页 |
·琼脂糖凝胶电泳 | 第31页 |
·目的条带的回收 | 第31-32页 |
·卡门柏青霉总RNA提取 | 第32-33页 |
·RNA的甲醛变性琼脂糖凝胶电泳 | 第33页 |
·cDNA第一链的合成 | 第33-34页 |
·CTAB法提取卡门柏青霉基因组DNA | 第34页 |
·基因序列的PCR扩增 | 第34页 |
·实验结果 | 第34-38页 |
·卡门柏青霉-PG3总RNA的提取 | 第34-35页 |
·成熟肽基因的PCR扩增 | 第35-36页 |
·卡门柏青霉-PG3脂肪酶基因组DNA的提取 | 第36页 |
·以总DNA为模板的PCR扩增 | 第36-37页 |
·PCR产物的克隆、鉴定 | 第37-38页 |
·基因序列分析 | 第38-42页 |
·核苷酸及其编码的蛋白质序列 | 第38-40页 |
·MDGL与其它脂肪酶一级结构的同源性比较 | 第40-42页 |
·小结 | 第42-43页 |
第三章 mdlA基因在大肠杆菌中的表达 | 第43-51页 |
·前言 | 第43-44页 |
·实验材料 | 第44页 |
·菌种与载体 | 第44页 |
·化学药品 | 第44页 |
·主要仪器 | 第44页 |
·实验方法 | 第44-47页 |
·聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第44-45页 |
·目的基因在大肠杆菌中的诱导表达 | 第45页 |
·包涵体蛋白的变性、复性 | 第45-46页 |
·NaOH滴定法测定脂肪酶活性 | 第46-47页 |
·实验结果 | 第47-50页 |
·表达质粒的构建 | 第47-48页 |
·重组质粒的酶切鉴定 | 第48页 |
·在大肠杆菌中的诱导表达 | 第48-50页 |
·生物学活性的测定 | 第50页 |
·小结 | 第50-51页 |
第四章 mdlA基因在毕赤酵母中的表达 | 第51-63页 |
·前言 | 第51-53页 |
·实验材料 | 第53页 |
·菌株与质粒 | 第53页 |
·化学药品及材料 | 第53页 |
·主要仪器 | 第53页 |
·培养基 | 第53页 |
·实验方法 | 第53-56页 |
·使用不同缓冲液的双酶切反应 | 第53页 |
·毕赤酵母GS115感受态细胞制备 | 第53-54页 |
·毕赤酵母GS115的电击转化 | 第54页 |
·毕赤酵母基因组提取方法 | 第54页 |
·Mut~+表型重组酵母的诱导表达实验 | 第54-55页 |
·对硝基苯酚显色法(p-NPL法)测定脂肪酶活性 | 第55-56页 |
·重组脂肪酶对甘油三酰酯脂肪酶水解脂肪的影响 | 第56页 |
·实验结果 | 第56-62页 |
·mdlA基因在毕赤酵母中的表达 | 第56-60页 |
·发酵条件优化 | 第60-61页 |
·表达产物对甘油三酰酯脂肪酶催化脂肪水解的影响 | 第61-62页 |
·小结 | 第62-63页 |
第五章 结论 | 第63-64页 |
参考文献 | 第64-71页 |
附录 | 第71-72页 |
致谢 | 第72-73页 |
攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第73页 |