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甘油单-二酰酯脂肪酶基因的克隆和表达

第一章 文献综述第1-27页
   ·脂肪酶简介第10页
   ·脂肪酶的微生物生产第10-14页
     ·脂肪酶产生菌第10-12页
     ·产脂肪酶菌种的选育第12页
     ·产脂肪酶微生物的筛选第12-13页
     ·利用微生物发酵生产脂肪酶第13-14页
   ·脂肪酶的结构与催化机理第14-16页
   ·脂肪酶作用的底物特异性第16-17页
     ·脂肪酸特异性第16页
     ·位置特异性第16页
     ·立体结构特异性第16-17页
   ·脂肪酶活力的测定第17-18页
     ·定量法第17页
     ·定性法第17-18页
   ·脂肪酶的固定化第18页
   ·脂肪酶的蛋白质工程改造第18-21页
     ·理性设计第18-19页
     ·定向进化第19-21页
   ·脂肪酶的应用第21-25页
     ·生产单甘酯第21-22页
     ·皮革生产第22-23页
     ·加酶洗涤剂第23页
     ·食品工业的应用第23页
     ·利用脂肪酶拆分手性化合物第23-24页
     ·油脂改性第24页
     ·环境污染治理第24-25页
   ·小结第25-27页
第二章 甘油单-二酰酯脂肪酶基因的克隆与序列分析第27-43页
   ·前言第27页
   ·实验材料第27-29页
     ·菌种第27页
     ·质粒第27页
     ·工具酶第27-28页
     ·化学药品及试剂盒第28页
     ·PCR引物第28页
     ·主要仪器第28-29页
     ·培养基第29页
   ·实验方法第29-34页
     ·碱裂解法微量制备质粒DNA第29-30页
     ·CaCl2法制备大肠杆菌感受态细胞第30页
     ·质粒DNA的转化第30-31页
     ·琼脂糖凝胶电泳第31页
     ·目的条带的回收第31-32页
     ·卡门柏青霉总RNA提取第32-33页
     ·RNA的甲醛变性琼脂糖凝胶电泳第33页
     ·cDNA第一链的合成第33-34页
     ·CTAB法提取卡门柏青霉基因组DNA第34页
     ·基因序列的PCR扩增第34页
   ·实验结果第34-38页
     ·卡门柏青霉-PG3总RNA的提取第34-35页
     ·成熟肽基因的PCR扩增第35-36页
     ·卡门柏青霉-PG3脂肪酶基因组DNA的提取第36页
     ·以总DNA为模板的PCR扩增第36-37页
     ·PCR产物的克隆、鉴定第37-38页
   ·基因序列分析第38-42页
     ·核苷酸及其编码的蛋白质序列第38-40页
     ·MDGL与其它脂肪酶一级结构的同源性比较第40-42页
   ·小结第42-43页
第三章 mdlA基因在大肠杆菌中的表达第43-51页
   ·前言第43-44页
   ·实验材料第44页
     ·菌种与载体第44页
     ·化学药品第44页
     ·主要仪器第44页
   ·实验方法第44-47页
     ·聚丙烯酰胺凝胶电泳第44-45页
     ·目的基因在大肠杆菌中的诱导表达第45页
     ·包涵体蛋白的变性、复性第45-46页
     ·NaOH滴定法测定脂肪酶活性第46-47页
   ·实验结果第47-50页
     ·表达质粒的构建第47-48页
     ·重组质粒的酶切鉴定第48页
     ·在大肠杆菌中的诱导表达第48-50页
     ·生物学活性的测定第50页
   ·小结第50-51页
第四章 mdlA基因在毕赤酵母中的表达第51-63页
   ·前言第51-53页
   ·实验材料第53页
     ·菌株与质粒第53页
     ·化学药品及材料第53页
     ·主要仪器第53页
     ·培养基第53页
   ·实验方法第53-56页
     ·使用不同缓冲液的双酶切反应第53页
     ·毕赤酵母GS115感受态细胞制备第53-54页
     ·毕赤酵母GS115的电击转化第54页
     ·毕赤酵母基因组提取方法第54页
     ·Mut~+表型重组酵母的诱导表达实验第54-55页
     ·对硝基苯酚显色法(p-NPL法)测定脂肪酶活性第55-56页
     ·重组脂肪酶对甘油三酰酯脂肪酶水解脂肪的影响第56页
   ·实验结果第56-62页
     ·mdlA基因在毕赤酵母中的表达第56-60页
     ·发酵条件优化第60-61页
     ·表达产物对甘油三酰酯脂肪酶催化脂肪水解的影响第61-62页
   ·小结第62-63页
第五章 结论第63-64页
参考文献第64-71页
附录第71-72页
致谢第72-73页
攻读学位期间发表的学术论文目录第73页

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