甘油单-二酰酯脂肪酶基因的克隆和表达
| 第一章 文献综述 | 第1-27页 |
| ·脂肪酶简介 | 第10页 |
| ·脂肪酶的微生物生产 | 第10-14页 |
| ·脂肪酶产生菌 | 第10-12页 |
| ·产脂肪酶菌种的选育 | 第12页 |
| ·产脂肪酶微生物的筛选 | 第12-13页 |
| ·利用微生物发酵生产脂肪酶 | 第13-14页 |
| ·脂肪酶的结构与催化机理 | 第14-16页 |
| ·脂肪酶作用的底物特异性 | 第16-17页 |
| ·脂肪酸特异性 | 第16页 |
| ·位置特异性 | 第16页 |
| ·立体结构特异性 | 第16-17页 |
| ·脂肪酶活力的测定 | 第17-18页 |
| ·定量法 | 第17页 |
| ·定性法 | 第17-18页 |
| ·脂肪酶的固定化 | 第18页 |
| ·脂肪酶的蛋白质工程改造 | 第18-21页 |
| ·理性设计 | 第18-19页 |
| ·定向进化 | 第19-21页 |
| ·脂肪酶的应用 | 第21-25页 |
| ·生产单甘酯 | 第21-22页 |
| ·皮革生产 | 第22-23页 |
| ·加酶洗涤剂 | 第23页 |
| ·食品工业的应用 | 第23页 |
| ·利用脂肪酶拆分手性化合物 | 第23-24页 |
| ·油脂改性 | 第24页 |
| ·环境污染治理 | 第24-25页 |
| ·小结 | 第25-27页 |
| 第二章 甘油单-二酰酯脂肪酶基因的克隆与序列分析 | 第27-43页 |
| ·前言 | 第27页 |
| ·实验材料 | 第27-29页 |
| ·菌种 | 第27页 |
| ·质粒 | 第27页 |
| ·工具酶 | 第27-28页 |
| ·化学药品及试剂盒 | 第28页 |
| ·PCR引物 | 第28页 |
| ·主要仪器 | 第28-29页 |
| ·培养基 | 第29页 |
| ·实验方法 | 第29-34页 |
| ·碱裂解法微量制备质粒DNA | 第29-30页 |
| ·CaCl2法制备大肠杆菌感受态细胞 | 第30页 |
| ·质粒DNA的转化 | 第30-31页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第31页 |
| ·目的条带的回收 | 第31-32页 |
| ·卡门柏青霉总RNA提取 | 第32-33页 |
| ·RNA的甲醛变性琼脂糖凝胶电泳 | 第33页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第33-34页 |
| ·CTAB法提取卡门柏青霉基因组DNA | 第34页 |
| ·基因序列的PCR扩增 | 第34页 |
| ·实验结果 | 第34-38页 |
| ·卡门柏青霉-PG3总RNA的提取 | 第34-35页 |
| ·成熟肽基因的PCR扩增 | 第35-36页 |
| ·卡门柏青霉-PG3脂肪酶基因组DNA的提取 | 第36页 |
| ·以总DNA为模板的PCR扩增 | 第36-37页 |
| ·PCR产物的克隆、鉴定 | 第37-38页 |
| ·基因序列分析 | 第38-42页 |
| ·核苷酸及其编码的蛋白质序列 | 第38-40页 |
| ·MDGL与其它脂肪酶一级结构的同源性比较 | 第40-42页 |
| ·小结 | 第42-43页 |
| 第三章 mdlA基因在大肠杆菌中的表达 | 第43-51页 |
| ·前言 | 第43-44页 |
| ·实验材料 | 第44页 |
| ·菌种与载体 | 第44页 |
| ·化学药品 | 第44页 |
| ·主要仪器 | 第44页 |
| ·实验方法 | 第44-47页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第44-45页 |
| ·目的基因在大肠杆菌中的诱导表达 | 第45页 |
| ·包涵体蛋白的变性、复性 | 第45-46页 |
| ·NaOH滴定法测定脂肪酶活性 | 第46-47页 |
| ·实验结果 | 第47-50页 |
| ·表达质粒的构建 | 第47-48页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第48页 |
| ·在大肠杆菌中的诱导表达 | 第48-50页 |
| ·生物学活性的测定 | 第50页 |
| ·小结 | 第50-51页 |
| 第四章 mdlA基因在毕赤酵母中的表达 | 第51-63页 |
| ·前言 | 第51-53页 |
| ·实验材料 | 第53页 |
| ·菌株与质粒 | 第53页 |
| ·化学药品及材料 | 第53页 |
| ·主要仪器 | 第53页 |
| ·培养基 | 第53页 |
| ·实验方法 | 第53-56页 |
| ·使用不同缓冲液的双酶切反应 | 第53页 |
| ·毕赤酵母GS115感受态细胞制备 | 第53-54页 |
| ·毕赤酵母GS115的电击转化 | 第54页 |
| ·毕赤酵母基因组提取方法 | 第54页 |
| ·Mut~+表型重组酵母的诱导表达实验 | 第54-55页 |
| ·对硝基苯酚显色法(p-NPL法)测定脂肪酶活性 | 第55-56页 |
| ·重组脂肪酶对甘油三酰酯脂肪酶水解脂肪的影响 | 第56页 |
| ·实验结果 | 第56-62页 |
| ·mdlA基因在毕赤酵母中的表达 | 第56-60页 |
| ·发酵条件优化 | 第60-61页 |
| ·表达产物对甘油三酰酯脂肪酶催化脂肪水解的影响 | 第61-62页 |
| ·小结 | 第62-63页 |
| 第五章 结论 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-71页 |
| 附录 | 第71-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第73页 |
