| 中文摘要 | 第1-7页 |
| 英文摘要 | 第7-9页 |
| 前言 | 第9-31页 |
| 一、 我国对虾养殖现状 | 第9-10页 |
| 二、 对虾的免疫系统 | 第10-15页 |
| 三、 无脊椎动物先天性免疫反应分子生物学研究进展 | 第15-25页 |
| 四、 mRNA差异显示技术 | 第25-30页 |
| 五、 本论文研究的思路、目的和意义 | 第30-31页 |
| 主要实验仪器 | 第31-32页 |
| 第一部分 通过DD-PCR克隆对虾抗病相关基因 | 第32-52页 |
| 材料与方法 | 第32-43页 |
| 一、 材料 | 第32-34页 |
| 二、 常用溶液的配制 | 第34-36页 |
| 三、 实验方法 | 第36-43页 |
| 结果与分析 | 第43-48页 |
| 一、 抗病斑节对虾和正常斑节对虾的病毒鉴定 | 第43-44页 |
| 二、 抗病斑节对虾和正常斑节对虾的肝胰腺T-RNA提取 | 第44页 |
| 三、 DD-PCR获得差异cDNA片段 | 第44-46页 |
| 四、 差异片段的重扩增 | 第46页 |
| 五、 差异片段的RNA杂交鉴定 | 第46-47页 |
| 六、 差异片段的DNA序列测定和分析 | 第47-48页 |
| 讨论 | 第48-51页 |
| 一、 抗病斑节对虾和正常对照斑节对虾的采集和保存 | 第49页 |
| 二、 DD-PCR的假阳性问题 | 第49-50页 |
| 三、 关于C型凝集素保守结构域 | 第50-51页 |
| 小结与展望 | 第51-52页 |
| 第二部分 斑节对虾肝胰腺全长cDNA表达文库的构建以及差异片段全长cDNA的获得和分析 | 第52-81页 |
| 材料与方法 | 第52-67页 |
| 一、 材料 | 第52-55页 |
| 二、 常用溶液的配制 | 第55-56页 |
| 三、 实验方法 | 第56-67页 |
| 结果与分析 | 第67-78页 |
| 一、 正常虾和抗病虾肝胰腺mRNA的提取 | 第67页 |
| 二、 初级文库的滴定 | 第67-68页 |
| 三、 扩增文库的滴定 | 第68页 |
| 四、 插入片段长度的鉴定 | 第68页 |
| 五、 文库噬菌体DNA的提取和肌动蛋白(actin)cDNA的扩增 | 第68-69页 |
| 六、 差异片段DDB的全长cDNA的获得 | 第69-78页 |
| 1 从文库噬菌体DNA中扩增 | 第69-75页 |
| 2 文库筛选 | 第75-76页 |
| 3 5’-RACE | 第76-78页 |
| 讨论 | 第78-80页 |
| 一、 cDNA文库的构建 | 第78-79页 |
| 二、 差异基因5’-UTR的可变性 | 第79-80页 |
| 小结与展望 | 第80-81页 |
| 第三部分 差异基因的原核重组表达及其功能的初步分析 | 第81-97页 |
| 材料与方法 | 第81-87页 |
| 一、 材料 | 第81-82页 |
| 二、 常用溶液的配制 | 第82-84页 |
| 三、 实验方法 | 第84-87页 |
| 结果与分析 | 第87-94页 |
| 一、 差异基因在表达文库中的重组表达 | 第87页 |
| 二、 差异基因在E.coli中的重组表达 | 第87-89页 |
| 三、 重组蛋白的纯化 | 第89-91页 |
| 四、 重组蛋白的复性(重折叠) | 第91页 |
| 五、 对照蛋白的表达和纯化 | 第91-93页 |
| 六、 重组蛋白的抗病毒分析 | 第93-94页 |
| 七、 重组蛋白的毒性分析 | 第94页 |
| 讨论 | 第94-96页 |
| 一、 差异基因的重组表达 | 第94-95页 |
| 二、 可溶性重组蛋白的获得 | 第95-96页 |
| 三、 重组蛋白的功能分析 | 第96页 |
| 小结与展望 | 第96-97页 |
| 第四部分 对虾天然抗病相关蛋白及其结合因子的纯化和抗病相关蛋白的免疫定位 | 第97-114页 |
| 材料与方法 | 第97-104页 |
| 一、 材料 | 第97页 |
| 二、 常用溶液的配制 | 第97-100页 |
| 三、 实验方法 | 第100-104页 |
| 结果与分析 | 第104-112页 |
| 一、 抗血清的获得和IgG的分离 | 第104-105页 |
| 二、 IgG的滴定 | 第105页 |
| 三、 抗体柱的制备 | 第105页 |
| 四、 抗体亲和层析 | 第105-106页 |
| 五、 Western杂交 | 第106-107页 |
| 六、 18kD蛋白的凝集活性试验 | 第107-108页 |
| 七、 18kD蛋白的凝集活性抑制分析 | 第108页 |
| 八、 18kD蛋白的质谱分析 | 第108-109页 |
| 九、 通过免疫电镜进行差异蛋白的细胞定位 | 第109-112页 |
| 讨论 | 第112-113页 |
| 一、 天然差异蛋白与虾病毒 | 第112页 |
| 二、 18kD蛋白和28kD蛋白 | 第112-113页 |
| 三、 差异蛋白的定位 | 第113页 |
| 小结与展望 | 第113-114页 |
| 总结与展望 | 第114-115页 |
| 参考文献 | 第115-139页 |
| 附录 | 第139-140页 |
| 致谢 | 第140页 |
