| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-8页 |
| 第一章 绪论 | 第8-14页 |
| ·环糊精葡萄糖基转移酶（CGT 酶）概述 | 第8-9页 |
| ·CGT 酶的来源 | 第8页 |
| ·CGT 酶的结构、功能与应用 | 第8-9页 |
| ·CGT 酶发酵生产的研究现状 | 第9-10页 |
| ·大肠杆菌表达系统及影响因素 | 第10-12页 |
| ·大肠杆菌表达系统介绍 | 第10-11页 |
| ·胞外蛋白在大肠杆菌中表达的影响因素 | 第11-12页 |
| ·立题依据及意义 | 第12页 |
| ·本论文的主要研究内容 | 第12-14页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第14-20页 |
| ·菌种与质粒 | 第14页 |
| ·工具酶与主要试剂 | 第14页 |
| ·主要仪器 | 第14页 |
| ·培养基 | 第14-15页 |
| ·种子培养基 | 第14-15页 |
| ·发酵培养基 | 第15页 |
| ·克隆表达方法 | 第15-16页 |
| ·E.coli JM109/pET20b(+)-γcgt 中质粒的提取 | 第15页 |
| ·DNA 琼脂糖核酸电泳 | 第15页 |
| ·胶回收目的片段 | 第15页 |
| ·重组表达载体pTrc99A-γcgt 和pKK223-3-γcgt 的构建 | 第15-16页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备与转化 | 第16页 |
| ·培养方法 | 第16-17页 |
| ·种子培养 | 第16页 |
| ·摇瓶发酵 | 第16-17页 |
| ·3 L 罐分批-补料发酵 | 第17页 |
| ·分析方法 | 第17-20页 |
| ·菌体生物量的测定 | 第17页 |
| ·细胞中不同组分γ-CGT 酶的制备 | 第17页 |
| ·γ-CGT 酶水解活力的测定 | 第17-18页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）检测表达产物 | 第18页 |
| ·蛋白含量的测定 | 第18页 |
| ·质粒稳定性测定 | 第18页 |
| ·正交试验的设计 | 第18-20页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第20-40页 |
| ·γ-CGT 酶在重组E.coli BL21(DE3)中的摇瓶发酵优化 | 第20-28页 |
| ·种子生长曲线以及种龄的确定 | 第20-21页 |
| ·发酵培养基的优化 | 第21-24页 |
| ·发酵培养基的正交优化 | 第24-26页 |
| ·发酵条件的优化 | 第26-28页 |
| ·γ-CGT 酶在重组E.coli BL21(DE3)中的3 L 发酵罐分批-补料研究 | 第28-31页 |
| ·甘氨酸对E.coli BL21(DE3)/pET20b(+)-γcgt 在3 L 罐中发酵产酶的影响 | 第28-29页 |
| ·诱导温度对E.coli BL21(DE3)/pET20b(+)-γcgt 在3 L 罐中发酵产酶的影响 | 第29-30页 |
| ·开始诱导时间对E.coli BL21(DE3) | 第30-31页 |
| ·降低合成强度，提高γ-CGT 酶表达量的发酵探索 | 第31-40页 |
| ·重组质粒pTrc99A-γcgt 和pKK223-3-γcgt 的构建 | 第32-33页 |
| ·E.coli BL21(DE3)/JM109/ W3110/pTrc99A-γcgt 的构建 | 第33-34页 |
| ·E.coli BL21(DE3)/JM109/ W3110/ pKK223-3-γcgt 的构建 | 第34页 |
| ·重组大肠杆菌的摇瓶诱导条件优化 | 第34-35页 |
| ·乳糖流速对E.coli JM109/pTrc99A-γcgt 在3 L 罐中发酵产酶的影响 | 第35-36页 |
| ·甘氨酸对E.coli JM109/pTrc99A-γcgt 在3 L 罐中发酵产酶的影响 | 第36-37页 |
| ·开始诱导时间对E.coli JM109/pTrc99A-γcgt 在3 L 罐中发酵产酶的影响 | 第37页 |
| ·诱导温度对E.coli JM109/pTrc99A-γcgt 在3 L 罐中发酵产酶的影响 | 第37-38页 |
| ·TritonX-100 对E.coli JM109/pTrc99A-γcgt 在3 L 罐中发酵产酶的影响 | 第38-40页 |
| 第四章 结论与展望 | 第40-42页 |
| ·结论 | 第40页 |
| ·展望 | 第40-42页 |
| 致谢 | 第42-44页 |
| 参考文献 | 第44-50页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第50页 |
