| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-7页 |
| 第一章 引言 | 第7-13页 |
| ·L-缬氨酸生物合成以及发酵中主要副产物 | 第7-8页 |
| ·L-缬氨酸产生菌选育进展及主要策略 | 第8-10页 |
| ·诱变育种 | 第8-9页 |
| ·代谢工程育种 | 第9-10页 |
| ·本课题研究的主要内容及意义 | 第10-13页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第13-23页 |
| ·实验材料 | 第13-16页 |
| ·实验试剂 | 第13页 |
| ·实验仪器 | 第13页 |
| ·培养基 | 第13-14页 |
| ·菌株、质粒及引物 | 第14-16页 |
| ·实验方法 | 第16-20页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第16页 |
| ·大肠杆菌粗酶液制备 | 第16页 |
| ·SDS-PAGE 凝胶电泳 | 第16页 |
| ·基因组DNA 提取 | 第16页 |
| ·质粒DNA 提取 | 第16-17页 |
| ·DNA 片段纯化 | 第17页 |
| ·胶回收DNA 片段 | 第17页 |
| ·酶切 | 第17页 |
| ·单切质粒去磷酸化 | 第17页 |
| ·酶连 | 第17页 |
| ·大肠杆菌JM109 感受态制备 | 第17页 |
| ·转化大肠杆菌JM109 | 第17页 |
| ·转化谷氨酸棒杆菌和黄色短杆菌 | 第17-18页 |
| ·PCR 反应 | 第18页 |
| ·L-缬氨酸生物合成基因的表达 | 第18页 |
| ·定点突变 | 第18页 |
| ·重叠PCR 制备△alaT △avtA | 第18-19页 |
| ·谷氨酸棒杆菌等位基因交换策略 | 第19页 |
| ·黄色短杆菌基因失活策略 | 第19-20页 |
| ·7 L 罐发酵方法 | 第20页 |
| ·分析方法 | 第20-23页 |
| ·发酵参数的测定 | 第20页 |
| ·AHAS 活性测定 | 第20-21页 |
| ·有机酸浓度测定 | 第21页 |
| ·氨基酸浓度测定 | 第21-23页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第23-39页 |
| ·L-缬氨酸生物合成的调节 | 第23-29页 |
| ·L-缬氨酸生物合成基因的表达 | 第23-25页 |
| ·不同ilv 基因表达对L-缬氨酸产量的影响 | 第25-26页 |
| ·B. flavum ATCC14067 pDXW-8-ilvEBNrC 不同发酵条件下动力学分析 | 第26-28页 |
| ·B. flavum ATCC14067 pDXW-8-ilvEBNrC 不同条件下AHAS 活性及副产物分布 | 第28-29页 |
| ·L-缬氨酸前体物质供给的调节以及副产物生成的最少化 | 第29-37页 |
| ·谷氨酸棒杆菌中等位基因交换策略 | 第29-32页 |
| ·黄色短杆菌中基因失活策略 | 第32-34页 |
| ·不同相对溶氧对L-缬氨酸的产量和副产物生成的影响 | 第34-35页 |
| ·alaT 基因失活对L-缬氨酸产量和L-丙氨酸生成的影响 | 第35-36页 |
| ·avtA 基因失活对L-缬氨酸产量和L-丙氨酸生成的影响 | 第36-37页 |
| ·结论 | 第37-38页 |
| ·课题展望 | 第38-39页 |
| 致谢 | 第39-41页 |
| 参考文献 | 第41-45页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第45页 |
