| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 绪论 | 第9-16页 |
| 1.1 D-阿洛酮糖概述 | 第9-10页 |
| 1.1.1 D-阿洛酮糖的结构与功能 | 第9页 |
| 1.1.2 D-阿洛酮糖的制备工艺 | 第9-10页 |
| 1.2 D-阿洛酮糖3-差向异构酶(DPEase)的概述 | 第10-12页 |
| 1.2.1 DPEase的来源与性质 | 第10-11页 |
| 1.2.2 DPEase的制备 | 第11-12页 |
| 1.3 枯草芽孢杆菌生产重组蛋白的研究进展 | 第12-13页 |
| 1.3.1 枯草芽孢杆菌表达系统的简介 | 第12页 |
| 1.3.2 枯草芽孢杆菌的高密度发酵 | 第12-13页 |
| 1.4 固定化技术及应用 | 第13-14页 |
| 1.4.1 固定化概述 | 第13-14页 |
| 1.4.2 固定化细胞的方法 | 第14页 |
| 1.5 立题依据及意义 | 第14-15页 |
| 1.6 本论文的研究内容 | 第15-16页 |
| 第二章 材料与方法 | 第16-23页 |
| 2.1 材料 | 第16-17页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第16页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第16页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第16-17页 |
| 2.2 分子生物学操作方法 | 第17-19页 |
| 2.2.1 DPEase目的基因和表达载体的克隆与连接 | 第17-18页 |
| 2.2.2 突变体的构建 | 第18页 |
| 2.2.3 E.coliJM109感受态的热激转化 | 第18页 |
| 2.2.4 质粒的提取与限制性酶切 | 第18页 |
| 2.2.5 B.subtilis感受态细胞的制备和电转化方法 | 第18-19页 |
| 2.3 发酵方法 | 第19-20页 |
| 2.3.1 培养基 | 第19页 |
| 2.3.2 重组B.subtilis的摇瓶发酵 | 第19页 |
| 2.3.3 重组B.subtilis的3-L罐发酵 | 第19-20页 |
| 2.4 分析方法 | 第20-21页 |
| 2.4.1 菌体生物量的测定 | 第20页 |
| 2.4.2 细胞干重的测定 | 第20页 |
| 2.4.3 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析 | 第20页 |
| 2.4.4 DPEase酶活测定 | 第20页 |
| 2.4.5 重组DPEase的酶学性质研究 | 第20-21页 |
| 2.5 D-阿洛酮糖的酶转化工艺 | 第21页 |
| 2.5.1 D-阿洛酮糖的制备 | 第21页 |
| 2.5.2 D-阿洛酮糖的检测方法 | 第21页 |
| 2.6 固定化细胞的方法 | 第21页 |
| 2.7 固定化细胞的性质分析 | 第21-23页 |
| 2.7.1 固定化细胞的酶活回收率分析 | 第21页 |
| 2.7.2 固定化细胞的酶学性质分析 | 第21-23页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第23-46页 |
| 3.1 DPEase在B.subtilis中的重组表达及酶学性质研究 | 第23-28页 |
| 3.1.1 重组DPEase基因工程菌的构建 | 第23-24页 |
| 3.1.2 重组DPEase在B.subtilis中的表达 | 第24-25页 |
| 3.1.3 重组DPEase的酶学性质研究 | 第25-28页 |
| 3.2 产DPEase的重组菌发酵条件优化 | 第28-37页 |
| 3.2.1 重组菌B.subtilis/pHY300PLK-PamyQ-dpe的摇瓶发酵优化 | 第28-32页 |
| 3.2.2 重组菌B.subtilis/pHY300PLK-PamyQ-dpe的3-L罐发酵优化 | 第32-35页 |
| 3.2.3 补料C/N影响重组菌发酵产酶原因的初步研究 | 第35-37页 |
| 3.3 重组DPEase及全细胞在制备D-阿洛酮糖中的应用 | 第37-41页 |
| 3.3.1 重组DPEase制备D-阿洛酮糖条件优化 | 第37-39页 |
| 3.3.2 重组B.subtilis细胞制备D-阿洛酮糖条件优化 | 第39-41页 |
| 3.4 重组菌的细胞固定化及固定化细胞性质的研究 | 第41-46页 |
| 3.4.1 固定化细胞条件的优化 | 第41-43页 |
| 3.4.2 固定化细胞的酶学性质研究 | 第43-44页 |
| 3.4.3 固定化细胞的操作稳定性 | 第44-46页 |
| 主要结论与展望 | 第46-48页 |
| 主要结论 | 第46页 |
| 展望 | 第46-48页 |
| 致谢 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-54页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第54页 |
