| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第一章 绪论 | 第8-17页 |
| 1.1 立题意义 | 第8页 |
| 1.2 国内外研究进展 | 第8-14页 |
| 1.2.1 酸性脂肪酶的来源与酶学性质 | 第8-9页 |
| 1.2.2 酸性脂肪酶的应用概况 | 第9-11页 |
| 1.2.3 毕赤酵母表达系统概述 | 第11页 |
| 1.2.4 在毕赤酵母中提高蛋白表达量的策略 | 第11-13页 |
| 1.2.5 提高脂肪酶催化活性的分子改造策略 | 第13页 |
| 1.2.6 体外胃肠消化模拟实验研究进展 | 第13-14页 |
| 1.3 本课题研究思路和研究内容 | 第14-17页 |
| 1.3.1 课题研究思路 | 第14-15页 |
| 1.3.2 课题研究内容 | 第15-16页 |
| 1.3.3 课题来源 | 第16-17页 |
| 第二章 材料和方法 | 第17-29页 |
| 2.1 实验材料 | 第17-18页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第17页 |
| 2.1.2 培养基与溶液 | 第17-18页 |
| 2.1.3 主要试剂与仪器 | 第18页 |
| 2.2 实验方法 | 第18-29页 |
| 2.2.1 重组ANL和ATL基因表达菌株的构建 | 第18-19页 |
| 2.2.2 重叠延伸、重组ANL融合表达质粒及工程菌的构建 | 第19-20页 |
| 2.2.3 定点突变、重组ATL突变表达质粒及工程菌的构建 | 第20-22页 |
| 2.2.4 基因重组菌株的菌株生长及蛋白表达 | 第22-23页 |
| 2.2.5 脂肪酶酶活力测定方法 | 第23页 |
| 2.2.6 重组蛋白的分离纯化与酶学性质测定 | 第23-25页 |
| 2.2.7 重组菌株在3L发酵罐高密度发酵 | 第25页 |
| 2.2.8 脂肪酶的结构分析 | 第25-26页 |
| 2.2.9 脂肪酶在胃肠消化模拟过程中功能的研究 | 第26-29页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第29-58页 |
| 3.1 黑曲霉脂肪酶ANL在毕赤酵母中的表达、纯化与酶学性质的研究 | 第29-37页 |
| 3.1.1 黑曲霉脂肪酶ANL在毕赤酵母中的表达 | 第29页 |
| 3.1.2 黑曲霉脂肪酶在毕赤酵母中的融合表达 | 第29-31页 |
| 3.1.3 黑曲霉脂肪酶重组菌株的3L发酵罐高密度发酵培养 | 第31-32页 |
| 3.1.4 黑曲霉脂肪酶的分离纯化与鉴定 | 第32-33页 |
| 3.1.5 黑曲霉脂肪酶酶学性质的研究 | 第33-37页 |
| 3.1.6 小结 | 第37页 |
| 3.2 土曲霉脂肪酶ATL在毕赤酵母中的表达、纯化与酶学性质的研究 | 第37-47页 |
| 3.2.1 土曲霉脂肪酶ATL在毕赤酵母中的表达 | 第37页 |
| 3.2.2 理性设计确定ATL突变位点 | 第37-40页 |
| 3.2.3 土曲霉脂肪酶突变酶重组菌株的诱导表达及分离纯化 | 第40-42页 |
| 3.2.4 土曲霉脂肪酶突变酶与野生型酶酶学性质的研究 | 第42-45页 |
| 3.2.5 土曲霉脂肪酶突变酶的结构分析 | 第45-47页 |
| 3.2.6 小结 | 第47页 |
| 3.3 脂肪酶的体外胃肠消化模拟实验 | 第47-58页 |
| 3.3.1 反应底物的选择及脂肪酶对底物的水解能力 | 第47-48页 |
| 3.3.2 胃肠消化反应中的抑制剂对酸性脂肪酶活性的影响 | 第48-53页 |
| 3.3.3 华根霉脂肪酶在体外胃肠消化模拟实验中的适用性研究 | 第53-56页 |
| 3.3.4 华根霉脂肪酶与酸性脂肪酶复配进行体外胃肠消化模拟实验 | 第56-57页 |
| 3.3.5 小结 | 第57-58页 |
| 主要结论与展望 | 第58-60页 |
| 主要结论 | 第58-59页 |
| 展望 | 第59-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-67页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第67页 |
