| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 缩略符号对照表 | 第7-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-25页 |
| 1.1 番茄红素研究概述 | 第12-16页 |
| 1.1.1 番茄红素简介 | 第12页 |
| 1.1.2 番茄红素的生理功能 | 第12-13页 |
| 1.1.3 番茄红素的来源 | 第13-16页 |
| 1.2 卷枝毛霉研究概述 | 第16-22页 |
| 1.2.1 卷枝毛霉简介 | 第16-17页 |
| 1.2.2 卷枝毛霉遗传操作系统研究概况 | 第17-18页 |
| 1.2.3 卷枝毛霉番茄红素合成途径 | 第18-21页 |
| 1.2.4 卷枝毛霉番茄红素合成调控路径 | 第21-22页 |
| 1.3 立题意义与依据 | 第22-23页 |
| 1.4 主要研究内容 | 第23-25页 |
| 第二章 调控因子crgA对卷枝毛霉类胡萝卜素合成的影响 | 第25-39页 |
| 2.1 前言 | 第25-26页 |
| 2.2 实验材料与设备 | 第26-28页 |
| 2.2.1 菌株与质粒 | 第26页 |
| 2.2.2 培养基及试剂的配置 | 第26-27页 |
| 2.2.3 主要试剂 | 第27-28页 |
| 2.2.4 主要仪器和设备 | 第28页 |
| 2.2.5 PCR引物 | 第28页 |
| 2.3 实验方法 | 第28-32页 |
| 2.3.1 大肠杆菌质粒的提取 | 第28-29页 |
| 2.3.2 卷枝毛霉基因组DNA的提取 | 第29页 |
| 2.3.3 PCR扩增 | 第29页 |
| 2.3.4 琼脂糖凝胶电泳及切胶回收 | 第29-30页 |
| 2.3.5 卷枝毛霉电转化 | 第30页 |
| 2.3.6 转化子筛选及验证 | 第30页 |
| 2.3.7 卷枝毛霉总RNA的提取 | 第30页 |
| 2.3.8 cDNA第一链合成 | 第30-31页 |
| 2.3.9 基因转录水平的ddPCR检测 | 第31页 |
| 2.3.10 卷枝毛霉类胡萝卜素提取与检测 | 第31-32页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第32-38页 |
| 2.4.1 卷枝毛霉crgA基因敲除株的获得 | 第32-35页 |
| 2.4.2 卷枝毛霉crgA基因敲除株的 !-胡萝卜素含量分析 | 第35-37页 |
| 2.4.3 卷枝毛霉中类胡萝卜素合成新型调控机制的初步探索 | 第37-38页 |
| 2.5 本章小结 | 第38-39页 |
| 第三章 番茄红素环化酶对卷枝毛霉番茄红素合成的影响 | 第39-52页 |
| 3.1 前言 | 第39-40页 |
| 3.2 实验材料与设备 | 第40-41页 |
| 3.2.1 菌株与质粒 | 第40页 |
| 3.2.2 培养基及试剂的配置 | 第40-41页 |
| 3.2.3 主要试剂 | 第41页 |
| 3.2.4 主要仪器和设备 | 第41页 |
| 3.2.5 PCR引物 | 第41页 |
| 3.3 实验方法 | 第41-43页 |
| 3.3.1 carRP突变基因片段的扩增 | 第41页 |
| 3.3.2 carRP突变基因片段的转化及筛选 | 第41-42页 |
| 3.3.3 NTG致死实验 | 第42页 |
| 3.3.4 诱变与筛选 | 第42页 |
| 3.3.5 carRP全长基因片段的扩增和测序 | 第42页 |
| 3.3.6 突变株的生物量和生长特性 | 第42页 |
| 3.3.7 类胡萝卜素含量及组分的测定分析 | 第42页 |
| 3.3.8 基因转录水平的RT-qPCR检测 | 第42-43页 |
| 3.3.9 突变株的稳定性实验 | 第43页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第43-51页 |
| 3.4.1 卷枝毛霉crgA基因敲除株中番茄红素环化酶的定点突变 | 第43-44页 |
| 3.4.2 卷枝毛霉crgA基因敲除株中番茄红素环化酶的随机突变与鉴定 | 第44-47页 |
| 3.4.3 番茄红素环化酶突变株生长特性 | 第47-48页 |
| 3.4.4 番茄红素环化酶突变株的类胡萝卜素组成及含量分析 | 第48-50页 |
| 3.4.5 番茄红素环化酶突变株的遗传稳定性 | 第50-51页 |
| 3.5 本章小结 | 第51-52页 |
| 第四章 甲羟戊酸途径限速酶（HMGr）对卷枝毛霉番茄红素合成的影响 | 第52-68页 |
| 4.1 前言 | 第52-53页 |
| 4.2 实验材料与设备 | 第53-55页 |
| 4.2.1 菌株和质粒 | 第53页 |
| 4.2.2 培养基及相关溶液配置 | 第53页 |
| 4.2.3 主要试剂 | 第53页 |
| 4.2.4 主要仪器和设备 | 第53页 |
| 4.2.5 PCR引物 | 第53-55页 |
| 4.3 实验方法 | 第55-59页 |
| 4.3.1 卷枝毛霉番茄红素合成途径相关酶转录组数据的分析比较 | 第56页 |
| 4.3.2 目的基因的亚克隆 | 第56页 |
| 4.3.3 质粒的酶切与连接 | 第56页 |
| 4.3.4 大肠杆菌感受态制备与转化 | 第56-57页 |
| 4.3.5 质粒的构建 | 第57-58页 |
| 4.3.6 卷枝毛霉番茄红素环化酶突变株Mut3对 5-FOA的耐受性测试 | 第58-59页 |
| 4.3.7 HMGr过表达质粒的转化 | 第59页 |
| 4.3.8 转化子的筛选与鉴定 | 第59页 |
| 4.3.9 基因转录水平的RT-qPCR | 第59页 |
| 4.3.10 番茄红素含量的测定 | 第59页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第59-66页 |
| 4.4.1 卷枝毛霉番茄红素合成途径相关酶表达水平分析 | 第59-60页 |
| 4.4.2 番茄红素合成途径限速酶HMGr表达质粒的获得 | 第60-63页 |
| 4.4.3 HMGr过表达重组菌株的获得及其番茄红素含量分析 | 第63-66页 |
| 4.5 本章小结 | 第66-68页 |
| 第五章 脂肪酸合成途径关键酶（FAS和ACC）对卷枝毛霉番茄红素合成的影响 | 第68-82页 |
| 5.1 前言 | 第68-70页 |
| 5.2 实验材料与设备 | 第70-71页 |
| 5.2.1 菌株和质粒 | 第70-71页 |
| 5.2.2 培养基及相关溶液 | 第71页 |
| 5.2.3 主要试剂 | 第71页 |
| 5.2.4 主要仪器和设备 | 第71页 |
| 5.2.5 PCR引物 | 第71页 |
| 5.3 实验方法 | 第71-73页 |
| 5.3.1 氮限制培养基中的发酵培养 | 第71-72页 |
| 5.3.2 卷枝毛霉中FAS和ACC表达水平的分析 | 第72页 |
| 5.3.3 FAS和ACC RNAi质粒的构建 | 第72页 |
| 5.3.4 FAS和ACC RNAi质粒的转化 | 第72页 |
| 5.3.5 转化子的筛选与鉴定 | 第72-73页 |
| 5.3.6 FAS和ACC抑制剂的添加 | 第73页 |
| 5.4 结果与讨论 | 第73-80页 |
| 5.4.1 卷枝毛霉中类胡萝卜素与脂质合成的关系 | 第73-74页 |
| 5.4.2 脂肪酸合成关键酶（FAS和ACC）在卷枝毛霉中的表达水平分析 | 第74页 |
| 5.4.3 FAS和ACC RNAi重组菌株的获得及其番茄红素含量分析 | 第74-78页 |
| 5.4.4 FAS和ACC抑制剂对番茄红素含量的影响 | 第78-80页 |
| 5.5 本章小结 | 第80-82页 |
| 第六章 重组卷枝毛霉合成番茄红素培养基碳、氮源条件优化 | 第82-89页 |
| 6.1 前言 | 第82页 |
| 6.2 实验材料与设备 | 第82-83页 |
| 6.2.1 菌株 | 第82页 |
| 6.2.2 培养基及相关溶液 | 第82页 |
| 6.2.3 主要试剂 | 第82-83页 |
| 6.2.4 主要仪器和设备 | 第83页 |
| 6.3 实验方法 | 第83页 |
| 6.3.1 碳源的优化 | 第83页 |
| 6.3.2 氮源的优化 | 第83页 |
| 6.3.3 发酵罐培养 | 第83页 |
| 6.4 结果与讨论 | 第83-87页 |
| 6.4.1 碳源（葡萄糖）对卷枝毛霉生长和番茄红素合成的影响 | 第83-84页 |
| 6.4.2 复杂氮源对卷枝毛霉生长和番茄红素合成的影响 | 第84-86页 |
| 6.4.3 重组卷枝毛霉在发酵罐中合成番茄红素 | 第86-87页 |
| 6.5 本章小结 | 第87-89页 |
| 主要结论与展望 | 第89-91页 |
| 创新点 | 第91-92页 |
| 致谢 | 第92-93页 |
| 参考文献 | 第93-104页 |
| 附录：攻读博士学位期间发表论文及专利申请情况 | 第104页 |
