| 摘要 | 第3-7页 |
| ABSTRACT | 第7-11页 |
| 第1章 引言 | 第15-24页 |
| 1.1 水产品腐败 | 第15-17页 |
| 1.1.1 水产品的腐败及其特定腐败菌 | 第15-16页 |
| 1.1.2 耐冷菌对冷藏水产品腐败的影响 | 第16-17页 |
| 1.2 蛋白质组学研究现状 | 第17-20页 |
| 1.2.1 蛋白质的分离鉴定 | 第17-18页 |
| 1.2.2 蛋白质定量技术 | 第18-19页 |
| 1.2.3 蛋白质生物信息学分析 | 第19-20页 |
| 1.3 微生物适冷机制研究现状 | 第20-22页 |
| 1.3.1 适冷微生物的适冷代谢机制 | 第20页 |
| 1.3.2 细胞膜流动性影响因素 | 第20-21页 |
| 1.3.3 不饱和脂肪酸合成途径研究进展 | 第21页 |
| 1.3.4 脂肪酸合成的调控 | 第21-22页 |
| 1.4 本课题得研究目的及意义 | 第22-24页 |
| 1.4.1 研究目的及意义 | 第22页 |
| 1.4.2 研究内容 | 第22-23页 |
| 1.4.3 研究技术路线 | 第23-24页 |
| 第二章 大黄鱼特定腐败菌Shewanella baltica腐败能力及适冷能力测定 | 第24-38页 |
| 2.1 前言 | 第24页 |
| 2.2 实验材料 | 第24-25页 |
| 2.2.1 实验菌株 | 第24页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第24-25页 |
| 2.2.3 主要仪器设备 | 第25页 |
| 2.3 实验方法 | 第25-29页 |
| 2.3.1 菌株的活化及培养 | 第25页 |
| 2.3.2 无菌鱼汁的制备 | 第25-26页 |
| 2.3.3 挥发性盐基氮(TVB-N)测定 | 第26页 |
| 2.3.4 三甲胺(TMA)测定 | 第26-27页 |
| 2.3.5 产量因子测定 | 第27页 |
| 2.3.6 细胞膜流动性测定 | 第27-28页 |
| 2.3.7 脂肪酸含量及成分测定 | 第28-29页 |
| 2.3.8 数据处理与分析 | 第29页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第29-37页 |
| 2.4.1 低温条件下挥发性盐基氮(TVB-N)的变化 | 第29-30页 |
| 2.4.2 低温条件下三甲胺(TMA)的变化 | 第30-31页 |
| 2.4.3 腐败产量因子分析 | 第31-32页 |
| 2.4.4 30℃及4℃条件下细胞膜流动性变化 | 第32-33页 |
| 2.4.5 30℃及4℃条件下脂肪酸组成变化 | 第33-37页 |
| 2.5 本章小结 | 第37-38页 |
| 第三章 不同培养温度下Shewanella baltica差异蛋白组学研究 | 第38-63页 |
| 3.1 前言 | 第38页 |
| 3.2 实验材料 | 第38-39页 |
| 3.2.1 菌株培养条件及预处理 | 第38-39页 |
| 3.2.2 主要试剂 | 第39页 |
| 3.2.3 主要仪器设备 | 第39页 |
| 3.3 实验方法 | 第39-47页 |
| 3.3.1 样本全蛋白提取 | 第39-40页 |
| 3.3.2 蛋白的胰酶酶解 | 第40页 |
| 3.3.3 TMT标记 | 第40-41页 |
| 3.3.4 标记肽段的HPLC预分离 | 第41页 |
| 3.3.5 液相色谱-质谱联用分析 | 第41-42页 |
| 3.3.6 数据库搜索 | 第42页 |
| 3.3.7 质谱数据质量控制 | 第42页 |
| 3.3.8 生物信息学分析 | 第42-43页 |
| 3.3.9 荧光定量PCR验证 | 第43-47页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第47-62页 |
| 3.4.1 质谱质控分析 | 第47-49页 |
| 3.4.2 蛋白基本鉴定信息与差异蛋白筛选 | 第49页 |
| 3.4.3 差异蛋白的功能分类 | 第49-53页 |
| 3.4.4 差异蛋白功能富集分析 | 第53-58页 |
| 3.4.5 qRT-PCR转录水平对耐冷及腐败相关差异蛋白的验证 | 第58-62页 |
| 3.5 本章小结 | 第62-63页 |
| 第四章 FabR及FadR的过量表达及其对Shewanella baltica适冷性及致腐能力的影响 | 第63-81页 |
| 4.1 前言 | 第63页 |
| 4.2 实验材料 | 第63-65页 |
| 4.2.1 菌株及培养条件 | 第63-64页 |
| 4.2.2 主要试剂 | 第64页 |
| 4.2.3 主要仪器设备 | 第64-65页 |
| 4.3 实验方法 | 第65-71页 |
| 4.3.1 质粒的扩增及提取 | 第65-66页 |
| 4.3.2 DNA提取 | 第66-67页 |
| 4.3.3 目的基因的PCR扩增及产物纯化 | 第67-68页 |
| 4.3.4 线性化载体制备 | 第68页 |
| 4.3.5 目的基因片段与线性化载体的重组 | 第68-69页 |
| 4.3.6 E.coli WM3064感受态制备 | 第69页 |
| 4.3.7 过表达菌株构建及验证 | 第69-71页 |
| 4.3.8 腐败及适冷表型测定 | 第71页 |
| 4.3.9 适冷及腐败相关基因表达量测定 | 第71页 |
| 4.3.10 数据处理与分析 | 第71页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第71-80页 |
| 4.4.1 FabR及FadR的过量表达验证 | 第71-73页 |
| 4.4.2 FabR及FadR的过量表达对S.baltica细胞膜流动性影响 | 第73-74页 |
| 4.4.3 FabR及FadR的过量表达对S.baltica细胞膜脂肪酸组成影响 | 第74-75页 |
| 4.4.4 FabR及FadR的过量表达对S.baltica挥发性盐基氮(TVB-N)形成影响 | 第75-77页 |
| 4.4.5 FabR及FadR的过量表达对S.baltica三甲胺(TMA)形成影响 | 第77页 |
| 4.4.6 FabR及FadR的过量表达菌株腐败产量因子分析 | 第77-79页 |
| 4.4.7 FabR及FadR的过量表达对S. baltica对适冷及腐败相关基因表达量影响 | 第79-80页 |
| 4.5 本章小结 | 第80-81页 |
| 第五章 结论、创新点及展望 | 第81-83页 |
| 5.1 结论 | 第81页 |
| 5.2 创新点 | 第81页 |
| 5.3 展望 | 第81-83页 |
| 参考文献 | 第83-89页 |
| 硕士期间发表的论文 | 第89-90页 |
| 致谢 | 第90-91页 |
