| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 绪论 | 第9-16页 |
| 1.1 环糊精葡萄糖基转移酶的概述 | 第9-11页 |
| 1.1.1 CGTase的来源 | 第9页 |
| 1.1.2 CGTase的功能与应用 | 第9-10页 |
| 1.1.3 CGTase的制备 | 第10-11页 |
| 1.2 枯草芽孢杆菌表达系统 | 第11-13页 |
| 1.2.1 枯草芽孢杆菌表达系统的概述 | 第11页 |
| 1.2.2 启动子和信号肽对枯草芽孢杆菌表达异源蛋白质的影响 | 第11-12页 |
| 1.2.3 枯草芽孢杆菌菌株改造的研究进展 | 第12-13页 |
| 1.3 成熟蛋白N末端氨基酸对蛋白质表达的影响 | 第13-14页 |
| 1.3.1 天然无序蛋白质的概述 | 第13-14页 |
| 1.3.2 N末端氨基酸性质与蛋白转运 | 第14页 |
| 1.4 立题依据及意义 | 第14-15页 |
| 1.5 本论文的研究内容 | 第15-16页 |
| 第二章 材料与方法 | 第16-29页 |
| 2.1 菌种与质粒 | 第16页 |
| 2.2 主要试剂 | 第16页 |
| 2.3 培养基 | 第16-17页 |
| 2.4 主要仪器 | 第17页 |
| 2.5 分子生物学操作 | 第17-25页 |
| 2.5.1 α/β-CGTase表达质粒的构建及验证 | 第17-18页 |
| 2.5.2 不同启动子表达质粒的构建及验证 | 第18-19页 |
| 2.5.3 筛选信号肽及重组表达质粒的构建及验证 | 第19-22页 |
| 2.5.4 替换α/β-CGTaseN末端 | 第22-23页 |
| 2.5.5 基因ppsE、sfp敲除质粒的构建 | 第23-24页 |
| 2.5.6 敲除B.subtilisWSH11基因ppsE和sfp | 第24-25页 |
| 2.5.7 E.coli感受态细胞的热激转化 | 第25页 |
| 2.5.8 B.subtilis感受态细胞的制备及电击转化 | 第25页 |
| 2.6 发酵方法 | 第25-26页 |
| 2.6.1 重组B.subtils摇瓶发酵培养 | 第25-26页 |
| 2.6.2 重组B.subtils3-L罐发酵培养 | 第26页 |
| 2.7 分析方法 | 第26-29页 |
| 2.7.1 菌浓(OD600)的测定 | 第26页 |
| 2.7.2 DNA琼脂糖凝胶电泳 | 第26页 |
| 2.7.3 SDS-PAGE分析 | 第26页 |
| 2.7.4 α/β-CGTase环化活力(α-CD合成活力)的测定 | 第26-27页 |
| 2.7.5 α/β-CGTasemRNA含量的测定 | 第27页 |
| 2.7.6 蛋白质浓度的测定 | 第27页 |
| 2.7.7 α/β-CGTase的分离纯化 | 第27页 |
| 2.7.8 α/β-CGTase的酶学性质研究 | 第27-29页 |
| 第三章 结果和讨论 | 第29-50页 |
| 3.1 启动子对α/β-CGTase在枯草芽孢杆菌异源表达的影响 | 第29-34页 |
| 3.1.1 不同单启动子对α/β-CGTase表达的影响 | 第29-31页 |
| 3.1.2 不同双启动子对α/β-CGTase表达的影响 | 第31-32页 |
| 3.1.3 不同启动子对α/β-CGTasemRNA转录水平的影响 | 第32-34页 |
| 3.1.4 最优启动子菌株CGTd2的3-L罐发酵 | 第34页 |
| 3.2 信号肽对α/β-CGTase在枯草芽孢杆菌异源表达的影响 | 第34-39页 |
| 3.2.1 信号肽的筛选 | 第35-36页 |
| 3.2.2 不同信号肽对α/β-CGTase表达的影响 | 第36-38页 |
| 3.2.3 最优信号肽菌株CGTd2sp1的3-L罐发酵 | 第38-39页 |
| 3.3 N末端替换对α/β-CGTase在枯草芽孢杆菌表达的影响及酶学性质研究 | 第39-46页 |
| 3.3.1 更换α/β-CGTaseN末端及重组表达质粒的构建 | 第41-42页 |
| 3.3.2 重组菌CGTd2sp1βN的构建及摇瓶发酵 | 第42-43页 |
| 3.3.3 重组菌CGTd2sp1βN的3-L罐发酵 | 第43-44页 |
| 3.3.4 α/β-CGTase野生型与突变体的酶学性质研究 | 第44-46页 |
| 3.4 采用CRISPR/Cas9系统敲除B.subtilis基因ppsE和sfp | 第46-50页 |
| 3.4.1 敲除质粒的构建与基因敲除 | 第47-48页 |
| 3.4.2 改造前后α/β-CGTase酶活对比及泡沫产量对比 | 第48-50页 |
| 主要结论与展望 | 第50-52页 |
| 主要结论 | 第50-51页 |
| 展望 | 第51-52页 |
| 致谢 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-59页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第59页 |
