| 摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 缩略语表 | 第14-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-30页 |
| 1 黄曲霉毒素 | 第15-24页 |
| 1.1 黄曲霉毒素的理化性质 | 第15-16页 |
| 1.2 黄曲霉毒素的毒性及限量标准 | 第16-19页 |
| 1.3 AFT的检测方法 | 第19-24页 |
| 1.3.1 生物检测分析法 | 第20页 |
| 1.3.2 理化检测分析法 | 第20-22页 |
| 1.3.3 免疫学检测分析法 | 第22-24页 |
| 2 抗独特型抗体 | 第24-28页 |
| 2.1 网络免疫学说 | 第24-26页 |
| 2.2 抗独特型抗体的制备方法 | 第26-27页 |
| 2.2.1 多克隆抗体技术 | 第26页 |
| 2.2.2 单克隆抗体技术 | 第26-27页 |
| 2.2.3 基因工程抗体技术 | 第27页 |
| 2.3 抗独特型抗体的应用 | 第27-28页 |
| 2.3.1 免疫学无毒检测 | 第27页 |
| 2.3.2 在疫苗研究中的应用 | 第27-28页 |
| 2.3.3 在自身免疫性疾病病理研究上的应用 | 第28页 |
| 3 研究意义、目的与内容 | 第28-30页 |
| 3.1 研究意义和目的 | 第28-29页 |
| 3.2 研究内容 | 第29-30页 |
| 第二章 抗体Fab片段的制备 | 第30-50页 |
| 1 材料 | 第30-33页 |
| 1.1 主要试剂 | 第30页 |
| 1.2 主要仪器 | 第30-31页 |
| 1.3 主要材料 | 第31页 |
| 1.4 主要溶液的配制 | 第31-33页 |
| 1.4.1 盐析主要溶液的配制 | 第31页 |
| 1.4.2 SDS-PAGE主要溶液配制 | 第31-32页 |
| 1.4.3 ELISA主要溶液的配制 | 第32页 |
| 1.4.4 蛋白A亲和层析主要溶液的配制 | 第32-33页 |
| 2 方法 | 第33-38页 |
| 2.1 抗AFB_1兔多克隆抗体的纯化 | 第33-36页 |
| 2.1.1 盐析法纯化多克隆抗体 | 第33页 |
| 2.1.2 抗体的蛋白含量测定以及纯化鉴定 | 第33-34页 |
| 2.1.3 抗体灵敏度分析 | 第34-36页 |
| 2.2 抗体Fab片段酶解条件优化 | 第36页 |
| 2.2.1 酶最佳用量的选择 | 第36页 |
| 2.2.2 半胱氨酸对酶解的影响 | 第36页 |
| 2.2.3 最佳pH的选择 | 第36页 |
| 2.2.4 酶解时间的选择 | 第36页 |
| 2.3 抗体Fab片段的纯化 | 第36-38页 |
| 2.3.1 蛋白A亲和层析分离纯化Fab片段 | 第36-37页 |
| 2.3.2 抗体Fab片段分离纯化鉴定 | 第37-38页 |
| 2.3.3 抗体Fab片段的灵敏度分析 | 第38页 |
| 3 结果与分析 | 第38-48页 |
| 3.1 抗AFB_1兔多克隆抗体的纯化 | 第38-40页 |
| 3.1.1 抗AFB_1兔多克隆抗体的纯化鉴定 | 第38-39页 |
| 3.1.2 抗体的灵敏度分析 | 第39-40页 |
| 3.2 抗体Fab片段酶解条件的优化 | 第40-44页 |
| 3.2.1 酶最佳用量的选择 | 第41页 |
| 3.2.2 半胱氨酸对酶解的影响 | 第41-42页 |
| 3.2.3 最佳pH的选择 | 第42-43页 |
| 3.2.4 酶解时间的选择 | 第43-44页 |
| 3.3 抗体Fab片段的鉴定分析 | 第44-48页 |
| 3.3.1 抗体Fab片段的得率 | 第44页 |
| 3.3.2 SDS-PAGE鉴定Fab片段 | 第44-45页 |
| 3.3.3 ELISA鉴定Fab片段 | 第45-47页 |
| 3.3.4 抗体Fab片段的灵敏度分析 | 第47-48页 |
| 4 小结与讨论 | 第48-50页 |
| 4.1 小结 | 第48页 |
| 4.2 讨论 | 第48-50页 |
| 4.2.1 抗体IgG的分离纯化方法 | 第48-49页 |
| 4.2.2 酶解制备Fab片段 | 第49页 |
| 4.2.3 Fab片段的分离纯化方法 | 第49页 |
| 4.2.4 Fab片段的鉴定 | 第49-50页 |
| 第三章 抗独特型多克隆抗体的制备及其性质分析 | 第50-62页 |
| 1 材料 | 第50-51页 |
| 1.1 主要试剂 | 第50页 |
| 1.2 主要仪器 | 第50-51页 |
| 1.3 主要材料 | 第51页 |
| 1.4 ELISA主要溶液的配制 | 第51页 |
| 2 方法 | 第51-53页 |
| 2.1 动物饲养及处理 | 第51页 |
| 2.2 免疫方案 | 第51-52页 |
| 2.2.1 抗原的乳化 | 第51页 |
| 2.2.2 小鼠免疫流程 | 第51-52页 |
| 2.3 抗血清的制备及分析 | 第52-53页 |
| 2.3.1 小鼠抗血清的收集 | 第52页 |
| 2.3.2 PcAb2产生进程 | 第52-53页 |
| 2.3.3 鼠PcAb2效价分析 | 第53页 |
| 2.3.4 抗AFB_1 PcAb2与AFB_1的镜像关系研究 | 第53页 |
| 3 结果与分析 | 第53-60页 |
| 3.1 包被抗原的选择 | 第53-54页 |
| 3.2 鼠PcAb2产生进程 | 第54-55页 |
| 3.3 鼠PcAb2效价分析 | 第55-57页 |
| 3.4 抗AFB_1 PcAb2与AFB_1的镜像关系研究 | 第57-60页 |
| 4 小结与讨论 | 第60-62页 |
| 4.1 小结 | 第60页 |
| 4.2 讨论 | 第60-62页 |
| 4.2.1 免疫原免疫剂量的选择 | 第60页 |
| 4.2.2 实验动物对抗独特型抗体的影响 | 第60-61页 |
| 4.2.3 免疫原对抗独特型抗体的影响 | 第61-62页 |
| 第四章 抗独特型单克隆抗体的制备及其性质分析 | 第62-79页 |
| 1 材料 | 第62-64页 |
| 1.1 主要试剂 | 第62-63页 |
| 1.2 主要仪器 | 第63页 |
| 1.3 主要材料 | 第63页 |
| 1.4 主要溶液的配制 | 第63-64页 |
| 1.4.1 细胞培养相关溶液的配制 | 第63-64页 |
| 1.4.2 染色体分析相关溶液的配制 | 第64页 |
| 1.4.3 ELISA相关溶液的配制 | 第64页 |
| 2 方法 | 第64-71页 |
| 2.1 细胞融合 | 第65-67页 |
| 2.1.1 瘤细胞的准备 | 第65-66页 |
| 2.1.2 脾细胞的制备 | 第66页 |
| 2.1.3 饲养细胞的制备 | 第66页 |
| 2.1.4 细胞融合 | 第66-67页 |
| 2.2 细胞系建株 | 第67-69页 |
| 2.2.1 融合细胞的筛选 | 第67页 |
| 2.2.2 阳性克隆细胞的亚克隆 | 第67页 |
| 2.2.3 杂交瘤细胞的冻存与复苏 | 第67页 |
| 2.2.4 杂交瘤细胞的染色体分析 | 第67-68页 |
| 2.2.5 杂交瘤细胞的稳定性分析 | 第68-69页 |
| 2.3 McAb2性质研究 | 第69-70页 |
| 2.3.1 McAb2的扩大培养 | 第69页 |
| 2.3.2 McAb2的纯化 | 第69页 |
| 2.3.3 McAb2的亲和常数测定 | 第69-70页 |
| 2.3.4 McAb2的效价测定 | 第70页 |
| 2.4 McAb2取代AFB_1标准品的应用研究 | 第70-71页 |
| 2.4.1 McAb2与AFB_1的镜像关系研究 | 第70页 |
| 2.4.2 加标回收实验 | 第70-71页 |
| 2.4.3 实际样品中AFB_1的检测 | 第71页 |
| 3 结果与分析 | 第71-77页 |
| 3.1 杂交瘤细胞的制备 | 第71-73页 |
| 3.1.1 杂交瘤细胞株的建立 | 第71页 |
| 3.1.2 杂交瘤细胞的染色体分析 | 第71-72页 |
| 3.1.3 杂交瘤细胞的稳定性分析 | 第72-73页 |
| 3.2 McAb2性质分析 | 第73-75页 |
| 3.2.1 McAb2的亲和常数分析 | 第73页 |
| 3.2.2 McAb2的效价分析 | 第73-75页 |
| 3.2.3 McAb2与AFB_1的镜像关系研究 | 第75页 |
| 3.3 加标回收实验结果分析 | 第75-77页 |
| 3.4 实际样品中AFB_1的检测 | 第77页 |
| 4 小结与讨论 | 第77-79页 |
| 4.1 小结 | 第77-78页 |
| 4.2 讨论 | 第78-79页 |
| 第五章 总结与展望 | 第79-81页 |
| 1 总结 | 第79-80页 |
| 2 展望 | 第80-81页 |
| 参考文献 | 第81-85页 |
| 致谢 | 第85-86页 |
| 附录 攻读硕士学位期间发表论文 | 第86页 |