| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5页 |
| 引言 | 第12-19页 |
| 0.1 桦褐孔菌研究概况 | 第12页 |
| 0.2 三萜化合物的研究 | 第12-15页 |
| 0.2.1 三萜化合物的结构 | 第12-13页 |
| 0.2.2 三萜化合物的合成途径 | 第13-14页 |
| 0.2.3 三萜化合物的提取 | 第14-15页 |
| 0.2 丝状真菌表达系统 | 第15-19页 |
| 0.2.1 丝状真菌表达系统的优点 | 第15-16页 |
| 0.2.2 丝状真菌的转化方法 | 第16页 |
| 0.2.3 丝状真菌表达载体 | 第16-19页 |
| 第1章 桦褐孔菌鲨烯合酶基因丝状真菌表达载体的构建 | 第19-33页 |
| 1.1 概述 | 第19页 |
| 1.2 实验材料 | 第19-20页 |
| 1.2.1 菌种和载体 | 第19页 |
| 1.2.2 主要试剂及试剂盒 | 第19-20页 |
| 1.2.3 培养基及溶液的配制方法 | 第20页 |
| 1.2.4 主要仪器及耗材(见附录) | 第20页 |
| 1.2.5 本章所用引物及序列 | 第20页 |
| 1.3 实验方法 | 第20-29页 |
| 1.3.1 真核表达载体pAN7-1的保存 | 第20-22页 |
| 1.3.2 丝状真菌表达质粒pAN7-1-SQS的构建 | 第22-29页 |
| 1.4 实验结果 | 第29-32页 |
| 1.4.1 载体pAN7-1的提取及酶切验证 | 第29页 |
| 1.4.2 重组质粒pAN7-1-SQS鉴定 | 第29-32页 |
| 1.5 小结 | 第32-33页 |
| 第2章 桦褐孔菌原生质体的制备与再生 | 第33-40页 |
| 2.1 概述 | 第33页 |
| 2.2 实验材料 | 第33-34页 |
| 2.2.1 菌种和酶 | 第33页 |
| 2.2.2 主要试剂与耗材 | 第33-34页 |
| 2.2.3 培养基及溶液的配制方法 | 第34页 |
| 2.2.4 主要仪器及耗材(见附录) | 第34页 |
| 2.3 实验方法 | 第34-36页 |
| 2.3.1 菌丝的制备 | 第34-35页 |
| 2.3.2 原生质体的制备 | 第35-36页 |
| 2.3.3 原生质体的再生 | 第36页 |
| 2.3.4 原生质体再生率 | 第36页 |
| 2.4 结果与分析 | 第36-39页 |
| 2.4.1 原生质体的制备结果与分析 | 第36-38页 |
| 2.4.2 原生质体的再生培养基的筛选结果 | 第38页 |
| 2.4.3 原生质体的再生率 | 第38-39页 |
| 2.5 小结 | 第39-40页 |
| 第3章 桦褐孔菌鲨烯合酶基因工程菌的构建及阳性转化子的筛选和鉴定 | 第40-52页 |
| 3.1 概述 | 第40页 |
| 3.2 实验材料 | 第40-41页 |
| 3.2.1 菌株和酶 | 第40页 |
| 3.2.2 主要试剂及耗材 | 第40-41页 |
| 3.2.3 培养基及溶液的配制方法 | 第41页 |
| 3.2.4 主要仪器及耗材(见附录) | 第41页 |
| 3.3 实验方法 | 第41-47页 |
| 3.3.1 桦褐孔菌对潮霉素敏感性实验 | 第41-42页 |
| 3.3.2 载体pAN7-1和重组质粒pAN7-1-SQS的大量提取及线性化 | 第42-43页 |
| 3.3.3 桦褐孔菌原生质体的制备 | 第43页 |
| 3.3.4 桦褐孔菌鲨烯合酶原生质体转化 | 第43-44页 |
| 3.3.5 转化子的分子生物学鉴定 | 第44-47页 |
| 3.4 结果与分析 | 第47-51页 |
| 3.4.1 桦褐孔菌对潮霉素B敏感性实验 | 第47-48页 |
| 3.4.2 载体pAN7-1和重组质粒pAN7-1-SQS的大量提取及线性化 | 第48-49页 |
| 3.4.3 桦褐孔菌鲨烯合酶原生质体转化 | 第49页 |
| 3.4.4 转化子的分子生物学鉴定 | 第49-51页 |
| 3.5 小结 | 第51-52页 |
| 第4章 桦褐孔菌基因工程菌中三萜化合物的测定 | 第52-58页 |
| 4.1 概述 | 第52页 |
| 4.2 实验材料 | 第52-53页 |
| 4.2.1 菌株 | 第52页 |
| 4.2.2 主要试剂 | 第52页 |
| 4.2.3 培养基及溶液的配制方法 | 第52-53页 |
| 4.2.4 主要仪器及耗材(见附录) | 第53页 |
| 4.3 实验方法 | 第53-54页 |
| 4.3.1 三萜化合物标准曲线的制作 | 第53页 |
| 4.3.2 桦褐孔菌菌丝干重和三萜化合物含量随时间的变化 | 第53-54页 |
| 4.3.3 桦褐孔菌三萜化合物的提取 | 第54页 |
| 4.4 结果与分析 | 第54-56页 |
| 4.4.1 三萜化合物标准曲线的制作 | 第54-55页 |
| 4.4.2 桦褐孔菌菌丝干重、三萜化合物含量随培养时间的变化 | 第55-56页 |
| 4.4.3 野生型和基因工程菌菌丝干重和三萜化合物含量的测定 | 第56页 |
| 4.5 小结 | 第56-58页 |
| 第5章 结论与展望 | 第58-60页 |
| 5.1 结论 | 第58页 |
| 5.2 展望 | 第58-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-65页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文及参加科研情况 | 第65-66页 |
| 附录1 主要仪器与耗材一览表 | 第66-67页 |
| 附录2 鲨烯合酶基因全序列 | 第67-68页 |
| 附录3 重组丝状表达载体PAN7-1-SQS基因全序列 | 第68-71页 |
