| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 英文缩略词与译名 | 第8-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-28页 |
| 1.1 研究目的和意义 | 第12-16页 |
| 1.1.1 苯乳酸、L-氨基酸氧化酶和苯丙酮酸 | 第12-13页 |
| 1.1.2 正丁醇和酪丁酸梭菌 | 第13-16页 |
| 1.2 研究现状和进展 | 第16-26页 |
| 1.2.1 L-氨基酸氧化酶的研究进展 | 第16-19页 |
| 1.2.2 苯乳酸的研究进展 | 第19-20页 |
| 1.2.3 正丁醇研究进展 | 第20-24页 |
| 1.2.4 酪丁酸梭菌研究进展 | 第24-26页 |
| 1.3 本课题研究的内容和目标 | 第26-28页 |
| 1.3.1 研究内容 | 第27页 |
| 1.3.2 研究目标 | 第27-28页 |
| 第二章 L-苯丙氨酸氧化酶的异源表达与苯丙酮酸生产 | 第28-44页 |
| 2.1 前言 | 第28页 |
| 2.2 材料与方法 | 第28-34页 |
| 2.2.1 主要仪器和试剂 | 第28-29页 |
| 2.2.2 菌株和质粒 | 第29页 |
| 2.2.3 培养基 | 第29页 |
| 2.2.4 灰盖鬼伞总RNA的提取 | 第29页 |
| 2.2.5 灰盖鬼伞总mRNA的提取及cDNA第一链合成 | 第29-30页 |
| 2.2.6 L-苯丙氨酸氧化酶基因CC-LPOX的克隆与氨基酸序列分析 | 第30页 |
| 2.2.7 酶活力、蛋白浓度测定及SDS-PAGE凝胶电泳 | 第30-31页 |
| 2.2.8 重组蛋白的纯化 | 第31页 |
| 2.2.9 重组蛋白的分子量测定 | 第31页 |
| 2.2.10 重组蛋白的最适pH和pH稳定性 | 第31-32页 |
| 2.2.11 重组蛋白的最适温度和温度稳定性 | 第32页 |
| 2.2.12 金属离子、化合物及FAD对CC-LPOX活力的影响 | 第32页 |
| 2.2.13 CC-LPOX的底物特异性及动力学常数 | 第32-33页 |
| 2.2.14 CC-LPOX转化L-苯丙氨酸生产PPA | 第33页 |
| 2.2.15 CC-LPOX拆分D,L-苯丙氨酸外消旋体 | 第33页 |
| 2.2.16 HPLC分析方法 | 第33-34页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第34-43页 |
| 2.3.1 CC-LPOX的基因克隆与氨基酸序列分析 | 第34-35页 |
| 2.3.2 CC-LPOX的纯化及分子量测定 | 第35-37页 |
| 2.3.3 CC-LPOX的最适pH及pH稳定性 | 第37页 |
| 2.3.4 CC-LPOX的最适温度、温度稳定性及半衰期 | 第37-38页 |
| 2.3.5 金属离子、化合物及FAD对CC-LPOX酶活力的影响 | 第38-40页 |
| 2.3.6 CC-LPOX的底物特异性及动力学常数 | 第40页 |
| 2.3.7 CC-LPOX转化L-苯丙氨酸生产PPA | 第40-42页 |
| 2.3.8 CC-LPOX拆分D,L-苯丙氨酸外消旋体 | 第42-43页 |
| 2.4 本章小结 | 第43-44页 |
| 第三章 L-苯丙氨酸氧化酶和乳酸脱氢酶共表达生产苯乳酸 | 第44-54页 |
| 3.1 前言 | 第44页 |
| 3.2 材料与方法 | 第44-46页 |
| 3.2.1 主要仪器和试剂 | 第44页 |
| 3.2.2 菌株和质粒 | 第44页 |
| 3.2.3 培养基 | 第44页 |
| 3.2.4 植物乳杆菌L.plantarum基因组DNA的提取 | 第44-45页 |
| 3.2.5 CC-LPOX与的乳酸脱氢酶(LDH)基因克隆与表达 | 第45页 |
| 3.2.6 全细胞高密度转化生产PLA条件优化 | 第45-46页 |
| 3.2.7 全细胞不同温度两阶段发酵生产PLA条件优化 | 第46页 |
| 3.2.8 HPLC分析方法 | 第46页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第46-53页 |
| 3.3.1 CC-LPOX与LDH的基因克隆与表达 | 第46-48页 |
| 3.3.2 全细胞高密度转化L-苯丙氨酸生产PLA条件优化 | 第48-51页 |
| 3.3.3 全细胞不同温度两阶段发酵生产PLA条件优化 | 第51-53页 |
| 3.4 本章小结 | 第53-54页 |
| 第四章 基因改造酪丁酸梭菌代谢蔗糖发酵生产正丁醇 | 第54-75页 |
| 4.1 前言 | 第54页 |
| 4.2 材料与方法 | 第54-60页 |
| 4.2.1 主要仪器和试剂 | 第54-55页 |
| 4.2.2 菌株,质粒以及引物序列 | 第55-56页 |
| 4.2.3 培养基 | 第56页 |
| 4.2.4 基因克隆及质粒构建 | 第56-57页 |
| 4.2.5 菌株C.tyrobutyricum (△ack)的基因改造 | 第57页 |
| 4.2.6 反转录PCR (RT-PCR)验证mRNA合成 | 第57-58页 |
| 4.2.7 基因改造菌株Ct(△ack-pscrBAK质粒遗传稳定性测定 | 第58页 |
| 4.2.8 基因改造菌株Ct(△ack)-pscrBAK发酵生产正丁醇 | 第58-59页 |
| 4.2.9 分析方法 | 第59-60页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第60-73页 |
| 4.3.1 基因克隆及质粒构建 | 第60-61页 |
| 4.3.2 基因改造菌株的构建 | 第61-62页 |
| 4.3.3 Ct(△ack)-pscrBAK代谢途经分析 | 第62-64页 |
| 4.3.4 反转录PCR (RT-PCR)验证mRNA合成 | 第64页 |
| 4.3.5 基因改造菌株Ct(△ack)-pscrBAK质粒遗传稳定性 | 第64-65页 |
| 4.3.6 基因改造菌株Ct(△ack)-pscrBAK发酵生产正丁醇 | 第65-72页 |
| 4.3.7 Ct(?ack)-pscrBAK发酵生产正丁醇总结及与其他ABE菌株发酵结果比较 | 第72-73页 |
| 4.4 本章小结 | 第73-75页 |
| 第五章 玉米浆为氮源纤维床固定化细胞发酵生产正丁醇 | 第75-88页 |
| 5.1 前言 | 第75页 |
| 5.2 材料与方法 | 第75-77页 |
| 5.2.1 主要仪器和试剂 | 第75页 |
| 5.2.2 菌株 | 第75页 |
| 5.2.3 培养基 | 第75-76页 |
| 5.2.4 玉米浆浓度对Ct(△ack)-pscrBAK发酵生产正丁醇的影响 | 第76页 |
| 5.2.5 Ct(△ack)-pscrBAK游离细胞发酵罐批次发酵(Batch)生产正丁醇 | 第76页 |
| 5.2.6 Ct(△ack)-pscrBAK游离细胞发酵罐批次补料发酵(Fed-Batch)生产正丁醇 | 第76页 |
| 5.2.7 纤维床固定Ct(△ack)-pscrBAK发酵罐重复批次发酵(Repeat-Batch)生产正丁醇 | 第76-77页 |
| 5.2.8 分析方法 | 第77页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第77-87页 |
| 5.3.1 CSL浓度对Ct(△ack)-pscrBAK发酵生产正丁醇的影响 | 第77-79页 |
| 5.3.2 Ct(△ack)-pscrBAK游离细胞发酵罐批次发酵生产正丁醇 | 第79-80页 |
| 5.3.3 Ct(△ack)-pscrBAK游离细胞发酵罐批次补料发酵生产正丁醇 | 第80-82页 |
| 5.3.4 纤维床固定Ct(△ack)-pscrBAK发酵罐重复批次发酵生产正丁醇 | 第82-85页 |
| 5.3.5 Ct(?ack)-pscrBAK以CSL为氮源生产正丁醇总结及与其他ABE生产菌株发醇结果比较 | 第85-87页 |
| 5.4 本章小结 | 第87-88页 |
| 第六章 结论与建议 | 第88-90页 |
| 6.1 结论 | 第88页 |
| 6.2 论文创新点 | 第88-89页 |
| 6.3 建议 | 第89-90页 |
| 参考文献 | 第90-100页 |
| 致谢 | 第100-101页 |
| 个人简介 | 第101页 |
