| 摘要 | 第1-14页 |
| ABSTRACT | 第14-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-32页 |
| 1 多粘类芽孢杆菌研究进展 | 第16-17页 |
| 2 多粘类芽孢杆菌产LI-F类脂肽研究进展 | 第17-18页 |
| 3 微生物诱变育种研究进展 | 第18-20页 |
| ·化学诱变育种 | 第18-19页 |
| ·物理诱变育种 | 第19-20页 |
| ·紫外诱变 | 第19页 |
| ·X射线及γ射线诱变 | 第19页 |
| ·离子束注入 | 第19-20页 |
| 4 原生质体融合技术在微生物育种中的应用 | 第20-23页 |
| ·原生质体融合技术 | 第20-21页 |
| ·化学诱导法 | 第20页 |
| ·物理诱导法 | 第20-21页 |
| ·亲本菌株的选择性遗传标记 | 第21-22页 |
| ·利用营养缺陷型作为遗传标记选择融合子 | 第21页 |
| ·利用抗药性作为遗传标记选择融合子 | 第21-22页 |
| ·如何提高融合率 | 第22-23页 |
| ·提高原生质体形成率 | 第22-23页 |
| ·提高原生质体再生率 | 第23页 |
| 5 实时荧光定量PCR技术在基因表差异分析中的应用研究 | 第23-24页 |
| 6 本研究的目的及内容 | 第24-25页 |
| 参考文献 | 第25-32页 |
| 第二章 HPLC定量检测脂肽LI-F方法的建立 | 第32-40页 |
| 1 材料与方法 | 第32-34页 |
| ·材料 | 第32-33页 |
| ·菌种 | 第32页 |
| ·主要试剂 | 第32页 |
| ·培养基 | 第32-33页 |
| ·主要仪器与设备 | 第33页 |
| ·方法 | 第33-34页 |
| ·多粘类芽孢杆菌JSa-9发酵液 | 第33页 |
| ·多粘类芽孢杆菌产脂肽LI-F粗提物的制备 | 第33页 |
| ·脂肽LI-F粗提物的制备型HPLC纯化 | 第33-34页 |
| ·脂肽LI-F的高效液相色谱分析 | 第34页 |
| ·脂肽LI-F纯品的制备及检测曲线的构建 | 第34页 |
| 2 结果与分析 | 第34-36页 |
| ·脂肽LI-F的制备纯化及HPLC检测 | 第34-35页 |
| ·HPLC定量检测脂肽LI-F方法的建立 | 第35-36页 |
| ·脂肽LI-F标准曲线的建立 | 第35-36页 |
| ·多粘类芽孢杆菌JSa-9发酵产脂肽LI-F含量的检测 | 第36页 |
| 3 讨论 | 第36-37页 |
| 4 本章小结 | 第37-38页 |
| 参考文献 | 第38-40页 |
| 第三章 多粘类芽孢杆菌Jsa-9理化诱变选育营养缺陷型菌株 | 第40-56页 |
| 1 材料与方法 | 第40-46页 |
| ·材料 | 第40-41页 |
| ·菌种 | 第40页 |
| ·主要试剂 | 第40页 |
| ·培养基与缓冲液 | 第40-41页 |
| ·主要仪器与设备 | 第41页 |
| ·方法 | 第41-46页 |
| ·菌体活化 | 第41-42页 |
| ·诱变剂及青霉素溶液的配制 | 第42页 |
| ·多粘类芽孢杆菌JSa-9诱变研究 | 第42-43页 |
| ·营养缺陷型菌株的筛选 | 第43-44页 |
| ·营养缺陷型类型的鉴定 | 第44-45页 |
| ·突变株发酵液对指示菌株的抑菌活性 | 第45页 |
| ·HPLC测定突变株LI-F类脂肽产量 | 第45页 |
| ·遗传稳定性实验 | 第45-46页 |
| 2 结果与分析 | 第46-50页 |
| ·理化诱变与最佳诱变剂量的确定 | 第46-48页 |
| ·硝基胍诱变 | 第46页 |
| ·~(60)Co-γ射线诱变 | 第46-47页 |
| ·低能N~+离子注入诱变 | 第47-48页 |
| ·理化诱变与营养缺陷型菌株的筛选 | 第48页 |
| ·突变株发酵液抑菌活性测定 | 第48-49页 |
| ·突变株产LI-F类抗菌脂肽产量测定 | 第49-50页 |
| ·传代遗传稳定性实验结果 | 第50页 |
| 3 讨论 | 第50-52页 |
| 4 本章小结 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-56页 |
| 第四章 原生质体融合选育多粘类芽孢杆菌JSa-9脂肽LI-F高产菌株 | 第56-72页 |
| 1 材料与方法 | 第56-60页 |
| ·材料 | 第56-57页 |
| ·菌种 | 第56页 |
| ·主要试剂 | 第56页 |
| ·培养基 | 第56-57页 |
| ·主要仪器与设备 | 第57页 |
| ·方法 | 第57-60页 |
| ·菌体活化 | 第57页 |
| ·菌株N1-37和N2-27生长曲线测定 | 第57-58页 |
| ·原生质体的制备 | 第58页 |
| ·原生质体的再生 | 第58页 |
| ·PEG诱导多粘类芽孢杆菌JSa-9原生质体融合 | 第58-59页 |
| ·融合子的检出 | 第59页 |
| ·高效液相色谱法测定融合子产LI-F类抗菌脂肽产量 | 第59页 |
| ·遗传稳定性实验 | 第59-60页 |
| 2 结果与分析 | 第60-67页 |
| ·菌株N1-37 N2-27生长曲线测定 | 第60-61页 |
| ·原生质体制备条件的优化 | 第61-64页 |
| ·菌株N1-37制备和再生条件的选择 | 第61-63页 |
| ·菌株N2-27原生质体制备和再生条件的选择 | 第63-64页 |
| ·最佳融合条件的选择 | 第64-66页 |
| ·PEG6000浓度对融合率的影响 | 第64-65页 |
| ·PEG 6000溶液pH值对融合率的影响 | 第65页 |
| ·融合时间对融合率的影响 | 第65-66页 |
| ·融合子发酵液抑菌活性测定 | 第66-67页 |
| ·融合子F5-15产LI-F类抗菌脂肽产量测定 | 第67页 |
| ·融合子F5-15传代遗传稳定性实验结果 | 第67页 |
| 3 讨论 | 第67-68页 |
| 4 本章小结 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-72页 |
| 第五章 融合菌株F5-15腊肽合成酶基因表达研究 | 第72-80页 |
| 1 材料与方法 | 第72-75页 |
| ·材料 | 第72-73页 |
| ·菌种 | 第72页 |
| ·主要试剂 | 第72页 |
| ·培养基 | 第72页 |
| ·主要仪器与设备 | 第72-73页 |
| ·方法 | 第73-75页 |
| ·引物设计 | 第73页 |
| ·提取RNA前的实验准备 | 第73页 |
| ·菌种活化 | 第73页 |
| ·Trizol法提取RNA | 第73页 |
| ·RNA质量分析鉴定 | 第73-74页 |
| ·反转录PCR | 第74页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第74-75页 |
| 2 结果与分析 | 第75-77页 |
| ·RNA提取 | 第75页 |
| ·反转录合成cDNA作为模板扩增目的基因 | 第75-76页 |
| ·内参基因与目的基因的qRT-PCR扩增 | 第76页 |
| ·样本中靶基因的相对定量 | 第76-77页 |
| 3 讨论 | 第77-78页 |
| 4 本章小结 | 第78-79页 |
| 参考文献 | 第79-80页 |
| 全文结论 | 第80-82页 |
| 创新点 | 第82-84页 |
| 攻读硕士期间发表的文章 | 第84-86页 |
| 致谢 | 第86页 |
