| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-7页 |
| 第一章 绪论 | 第7-14页 |
| ·V-ATP酶的简述 | 第7-11页 |
| ·V-ATP酶的结构与质子转运机制 | 第7-9页 |
| ·V-ATP酶的活性调节机制 | 第9-10页 |
| ·V-ATP酶的研究意义 | 第10-11页 |
| ·RAVE的研究进展 | 第11-12页 |
| ·RAVE的结构解析 | 第11-12页 |
| ·RAVE的功能与各亚基的作用 | 第12页 |
| ·本课题的研究背景、意义和主要内容 | 第12-13页 |
| ·本课题的实验思路 | 第13-14页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第14-27页 |
| ·实验材料 | 第14-18页 |
| ·菌种 | 第14页 |
| ·实验主要试剂 | 第14页 |
| ·实验仪器 | 第14-15页 |
| ·培养基 | 第15页 |
| ·实验试剂配制 | 第15-18页 |
| ·实验方法 | 第18-27页 |
| ·酿酒酵母基因组的提取 | 第18-19页 |
| ·引物设计 | 第19页 |
| ·RAV1 3’端添加FLAG标签基因序列的同源重组片段(R1-F-K-H1)的构建 | 第19-21页 |
| ·RAV2 3’端添加FLAG标签基因序列的同源重组片段(R2-F-K-H2)的构建 | 第21-22页 |
| ·酿酒酵母感受态的制备 | 第22-23页 |
| ·同源重组片段的转化 | 第23页 |
| ·重组菌株的筛选 | 第23-24页 |
| ·从重组菌株纯化RAVE-V1复合物 | 第24页 |
| ·FLAG-tag融合蛋白免疫印迹检测 | 第24-25页 |
| ·MALDI-TOF/TOF MS鉴定蛋白 | 第25-27页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第27-42页 |
| ·酿酒酵母BY4742的基因组提取 | 第27页 |
| ·RAV1 3’端带有FLAG标记的重组菌株BY4742 RAV1-FLAG的构建与筛选 | 第27-32页 |
| ·同源重组片段R1-F-K-H1的扩增 | 第28-29页 |
| ·同源重组片段R1-F-K-H1的转化 | 第29-30页 |
| ·重组菌株BY4742 RAV1-FLAG的筛选 | 第30页 |
| ·重组菌株BY4742 RAV1-FLAG与原菌的生长比较 | 第30-32页 |
| ·RAV2 3’端带有FLAG标记的重组菌株BY4742 RAV2-FLAG的构建与筛选 | 第32-36页 |
| ·同源重组片段R2-F-K-H2的扩增 | 第32-33页 |
| ·同源重组片段R2-F-K-H2的转化 | 第33-34页 |
| ·重组菌株BY4742 RAV2-FLAG的筛选 | 第34-35页 |
| ·重组菌株BY4742 RAV2-FLAG与原菌的生长比较 | 第35-36页 |
| ·重组菌株中RAVE-V_1复合物的纯化 | 第36-38页 |
| ·重组菌株BY4742 RAV1-FLAG中RAVE-V_1复合物的纯化 | 第36-37页 |
| ·重组菌株BY4742 RAV2-FLAG中RAVE-V_1复合物的纯化 | 第37-38页 |
| ·融合蛋白的免疫印迹检测 | 第38-39页 |
| ·Rav1p-FLAG融合蛋白的免疫印迹检测 | 第38页 |
| ·Rav2p-FLAG融合蛋白的免疫印迹检测 | 第38-39页 |
| ·MALDI-TOF/TOF MS质谱鉴定 | 第39-42页 |
| ·重组菌株BY4742 RAV1-FLAG纯化产物的质谱鉴定 | 第39-40页 |
| ·重组菌株BY4742 RAV2-FLAG纯化产物的质谱鉴定 | 第40-42页 |
| 主要结论与展望 | 第42-43页 |
| 主要结论 | 第42页 |
| 展望 | 第42-43页 |
| 致谢 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-47页 |
| 附录 | 第47-58页 |
| 附录A：重组菌株BY4742 RAV1-FLAG纯化产物的质谱鉴定结果 | 第47-51页 |
| 附录B：重组菌株BY4742 RAV2-FLAG纯化产物的质谱鉴定结果 | 第51-58页 |
| 附录C：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第58页 |
| 附录D：作者在攻读硕士学位期间申请的专利 | 第58页 |
