| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-14页 |
| 引言 | 第14-16页 |
| 第1章 文献综述 | 第16-29页 |
| ·血栓性病 | 第16页 |
| ·血栓的形成与溶解机制 | 第16-19页 |
| ·血栓疾病的治疗方法 | 第19-20页 |
| ·溶栓药物的应用和研究进展 | 第20-25页 |
| ·链激酶(Streptokinase,SK) | 第20-21页 |
| ·尿激酶(Urokinase,UK) | 第21页 |
| ·组织型纤溶酶原激活剂(tissue type plasminogen activator,t-PA) | 第21-22页 |
| ·茴香酰化纤溶酶原-链激酶激活剂复合物(anisoylated plasminogenstreptokinase activator complex,APSAC) | 第22页 |
| ·单链尿激酶型纤溶酶原激活剂(single chain urokinase plasminogen activitor,scu-PA) | 第22页 |
| ·吸血蝙蝠唾液纤溶酶原激活剂(Bat-PA,DSPAα1) | 第22-23页 |
| ·葡激酶(staphylokinase,SaK) | 第23页 |
| ·蛇毒溶栓酶(snake venom fibrinoenase) | 第23-24页 |
| ·瑞替普酶(reteplase,r-PA) | 第24页 |
| ·兰替普酶(lanoteplase,NPA) | 第24页 |
| ·替尼普酶(tenecteplase,TNK-t-PA) | 第24页 |
| ·孟替普酶(monteplase) | 第24页 |
| ·K1K2Pu嵌合体 | 第24-25页 |
| ·抗纤维蛋白单克隆抗体与t-PA的结合体 | 第25页 |
| ·国内外微生物产纤溶酶的研究现状 | 第25-28页 |
| ·β-溶血链球菌(Streptococcus homolyticus) | 第25-26页 |
| ·金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus) | 第26页 |
| ·纳豆杆菌(Bacillus natto) | 第26页 |
| ·枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis) | 第26页 |
| ·解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens) | 第26-27页 |
| ·蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus) | 第27页 |
| ·曲霉(Aspergillus sydowij) | 第27页 |
| ·根霉(Rhizopus Chinensis) | 第27页 |
| ·里氏木霉(Trichoderma reesei) | 第27页 |
| ·链霉菌(Streptonyces sp.) | 第27页 |
| ·海洋假单胞菌(Pseudomonas Maine) | 第27-28页 |
| ·脉胞霉(Neurospora sp.) | 第28页 |
| ·立题意义 | 第28页 |
| ·研究内容 | 第28-29页 |
| ·出发菌的筛选 | 第28页 |
| ·Bc-05的发酵条件优化 | 第28页 |
| ·酶的纯化及其酶学性质的初步研究 | 第28-29页 |
| 第2章 产纤溶酶菌株的筛选与鉴定 | 第29-38页 |
| ·材料 | 第29-30页 |
| ·试验材料 | 第29页 |
| ·主要试剂 | 第29页 |
| ·缓冲液 | 第29页 |
| ·主要仪器设备 | 第29页 |
| ·培养基 | 第29-30页 |
| ·试验方法 | 第30-31页 |
| ·菌株的分离筛选 | 第30页 |
| ·纤溶酶活性测定 | 第30页 |
| ·产纤溶酶菌株的筛选 | 第30页 |
| ·Bc-05菌株形态及生理生化特征鉴定 | 第30页 |
| ·16S rDNA序列测定 | 第30-31页 |
| ·16S rDNA序列分析及系统发育树绘制 | 第31页 |
| ·结果与分析 | 第31-37页 |
| ·产纤溶酶活性菌株的筛选 | 第31-32页 |
| ·Bc-05菌株菌落形态 | 第32页 |
| ·Bc-05菌株菌体形态 | 第32页 |
| ·Bc-05菌株生理生化特性 | 第32-35页 |
| ·Bc-05菌株的16S rDNA测序结果 | 第35-37页 |
| ·讨论 | 第37-38页 |
| 第3章 蜡状芽孢杆菌Bc-05菌株产纤溶酶的发酵条件优化 | 第38-48页 |
| ·材料 | 第38页 |
| ·试验菌株 | 第38页 |
| ·试验试剂 | 第38页 |
| ·培养基 | 第38页 |
| ·试验方法 | 第38-40页 |
| ·氮源对Bc-05菌株产酶的影响 | 第38-39页 |
| ·碳源对Bc-05菌株产酶的影响 | 第39页 |
| ·无机离子对Bc-05菌株产酶的影响 | 第39页 |
| ·正交试验优选培养基成分配比 | 第39页 |
| ·培养条件对Bc-05菌株产酶的影响 | 第39页 |
| ·Bc-05菌株产酶曲线的确定 | 第39页 |
| ·纤溶酶活力测定 | 第39-40页 |
| ·结果与分析 | 第40-47页 |
| ·尿激酶活力标准曲线 | 第40页 |
| ·发酵培养基主要成分对Bc-05菌株产酶的影响 | 第40-42页 |
| ·发酵培养基主要成分的正交试验 | 第42-44页 |
| ·发酵工艺条件对Bc-05菌株产纤溶酶的影响 | 第44-46页 |
| ·Bc-05菌株产酶曲线的确定 | 第46-47页 |
| ·讨论 | 第47-48页 |
| 第4章 蜡状芽孢杆菌Bc-05菌株纤溶酶的分离纯化 | 第48-59页 |
| ·材料 | 第48-50页 |
| ·试验菌株 | 第48页 |
| ·培养基 | 第48页 |
| ·主要试剂和缓冲液 | 第48-49页 |
| ·主要仪器设备 | 第49-50页 |
| ·方法 | 第50-51页 |
| ·纤溶酶活力测定 | 第50页 |
| ·蛋白质浓度的测定 | 第50页 |
| ·硫酸铵分级沉淀和纤溶酶的提取 | 第50页 |
| ·DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析 | 第50页 |
| ·酶的纯度和分子量测定 | 第50-51页 |
| ·Fibrin-PAGE电泳 | 第51页 |
| ·转膜与测序 | 第51页 |
| ·结果 | 第51-57页 |
| ·尿激酶活力标准曲线 | 第51页 |
| ·蛋白质浓度曲线 | 第51-52页 |
| ·B.cereus Bc-05菌株发酵液硫酸铵分级沉淀 | 第52-53页 |
| ·B.cereus Bc-05纤溶酶的DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析 | 第53-54页 |
| ·分离组分的SDS-PAGE电泳纯度鉴定 | 第54-55页 |
| ·分离组分的Fibrin-PAGE电泳 | 第55-56页 |
| ·转膜与测序结果 | 第56-57页 |
| ·纯化方案的评价 | 第57页 |
| ·讨论 | 第57-59页 |
| 第5章 蜡状芽孢杆菌Bc-05菌株纤溶酶的酶学性质研究 | 第59-68页 |
| ·材料 | 第59页 |
| ·试验材料 | 第59页 |
| ·试剂 | 第59页 |
| ·试验方法 | 第59-61页 |
| ·纤溶酶活力测定 | 第59页 |
| ·对纤溶酶原激活作用的测定 | 第59页 |
| ·最适温度及温度稳定性测定 | 第59-60页 |
| ·最适pH及pH稳定性测定 | 第60页 |
| ·抑制剂对Bc-05-1纤溶酶活性的影响 | 第60页 |
| ·金属离子对Bc-05-1纤溶酶活性的影响 | 第60页 |
| ·蛋白变性剂对Bc-05-1纤溶酶活性的影响 | 第60页 |
| ·蛋白酶对Bc-05-1纤溶酶活性的影响 | 第60-61页 |
| ·Bc-05-1纤溶酶体外血凝块的溶解作用 | 第61页 |
| ·结果与分析 | 第61-66页 |
| ·尿激酶活力标准曲线 | 第61页 |
| ·纤维蛋白溶酶原(plasminogen)激活活性测定 | 第61页 |
| ·最适温度及温度稳定性测定 | 第61-62页 |
| ·最适pH及pH稳定性 | 第62-63页 |
| ·抑制剂对Bc-05-1纤溶酶活性的影响 | 第63-64页 |
| ·金属离子对Bc-05-1纤溶酶活性的影响 | 第64页 |
| ·变性剂对Bc-05-1纤溶酶活性的影响 | 第64-66页 |
| ·蛋白酶对Bc-05-1纤溶酶活性的影响 | 第66页 |
| ·Bc-05-1纤溶酶体外血凝块的溶解作用 | 第66页 |
| ·讨论 | 第66-68页 |
| 第6章 结论与创新点 | 第68-69页 |
| 附录 | 第69-71页 |
| 参考文献 | 第71-77页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第77-78页 |
| 致谢 | 第78页 |
