| 摘要 | 第3-7页 |
| ABSTRACT | 第7-11页 |
| 第一章 引言 | 第16-31页 |
| 1.1 甜味感应生物学基础 | 第16-23页 |
| 1.1.1 甜味感应细胞研究模型 | 第16-19页 |
| 1.1.1.1 肠道甜味感应细胞 | 第16-18页 |
| 1.1.1.2 其他组织甜味感应细胞 | 第18-19页 |
| 1.1.2 甜味感应关键因子 | 第19-21页 |
| 1.1.3 甜味信号转导途径 | 第21-23页 |
| 1.2 人工甜味剂与甜度研究的进展 | 第23-27页 |
| 1.2.1 人工甜味剂安全性研究现状 | 第23-26页 |
| 1.2.2 甜度 | 第26-27页 |
| 1.2.2.1 甜度定义及意义 | 第26页 |
| 1.2.2.2 甜度检测现状 | 第26-27页 |
| 1.3 研究目标、意义及技术路线 | 第27-31页 |
| 1.3.1 研究目标与内容 | 第27-29页 |
| 1.3.2 研究意义 | 第29-30页 |
| 1.3.3 实验技术路线 | 第30-31页 |
| 第二章 甜味感应细胞培养及筛选 | 第31-48页 |
| 2.1 引言 | 第31-32页 |
| 2.2 实验材料与仪器设备 | 第32-35页 |
| 2.2.1 菌种与试剂 | 第32-33页 |
| 2.2.2 仪器与设备 | 第33页 |
| 2.2.3 实验主要试剂的配制 | 第33-35页 |
| 2.3 实验技术路线与方法 | 第35-44页 |
| 2.3.1 实验技术路线 | 第35页 |
| 2.3.2 STC-1细胞的培养 | 第35-37页 |
| 2.3.2.1 细胞的复苏 | 第35-36页 |
| 2.3.2.2 细胞的传代 | 第36页 |
| 2.3.2.3 细胞冻存 | 第36-37页 |
| 2.3.3 NCI-H716细胞培养 | 第37-38页 |
| 2.3.3.1 细胞复苏 | 第37页 |
| 2.3.3.2 细胞传代 | 第37页 |
| 2.3.3.3 细胞冻存 | 第37-38页 |
| 2.3.4 HEK-293细胞培养 | 第38-39页 |
| 2.3.4.1 细胞复苏 | 第38页 |
| 2.3.4.2 细胞传代 | 第38页 |
| 2.3.4.3 细胞冻存 | 第38-39页 |
| 2.3.5 甜味受体蛋白瞬时表达于HEK-293细胞 | 第39-40页 |
| 2.3.5.1 质粒转化 | 第39页 |
| 2.3.5.2 质粒提取 | 第39页 |
| 2.3.5.3 质粒转染 | 第39-40页 |
| 2.3.6 瞬时转染mRNA水平的检验 | 第40-42页 |
| 2.3.6.1 细胞总RNA的提取 | 第40-41页 |
| 2.3.6.2 qPCR(quantitative polymerase chain reaction) | 第41-42页 |
| 2.3.7 通过钙影像技术筛选甜味感应细胞 | 第42-43页 |
| 2.3.8 数据处理与统计 | 第43-44页 |
| 2.4 实验结果与讨论 | 第44-47页 |
| 2.4.1 细胞培养状态 | 第44-45页 |
| 2.4.2 瞬时表达mRNA水平鉴定 | 第45-46页 |
| 2.4.3 甜味感应细胞模型的建立 | 第46-47页 |
| 2.5 本章小结 | 第47-48页 |
| 第三章 人工甜味剂长期暴露影响甜味感应细胞甜味受体蛋白表达 | 第48-62页 |
| 3.1 前言 | 第48-49页 |
| 3.2 实验材料及仪器设备 | 第49-52页 |
| 3.2.1 菌种与试剂 | 第49-50页 |
| 3.2.2 仪器与设备 | 第50页 |
| 3.2.3 主要试剂的配制 | 第50-52页 |
| 3.3 实验设计与方法 | 第52-57页 |
| 3.3.1 实验技术路线 | 第52-53页 |
| 3.3.2 细胞蛋白免疫印迹(WB)方法的优化 | 第53-56页 |
| 3.3.3 甜味剂暴露甜度的筛选 | 第56页 |
| 3.3.4 sucralose长期暴露对甜味受体蛋白表达的影响 | 第56页 |
| 3.3.5 数据统计分析 | 第56-57页 |
| 3.4 实验结果与讨论 | 第57-60页 |
| 3.4.1 细胞蛋白提取过程的优化结果 | 第57页 |
| 3.4.2 sucralose暴露甜度的确定 | 第57-59页 |
| 3.4.3 sucralose暴露促进甜味感应细胞甜味受体的表达 | 第59-60页 |
| 3.4.3.1 蛋白水平表达的增加 | 第59页 |
| 3.4.3.2 mRNA水平表达的增加 | 第59-60页 |
| 3.5 小结 | 第60-62页 |
| 第四章 甜度、甜味受体表达量与胞内Ca2+浓度的相关性 | 第62-80页 |
| 4.1 前言 | 第62-63页 |
| 4.2 实验材料及仪器设备 | 第63-65页 |
| 4.2.1 菌种与试剂 | 第63-64页 |
| 4.2.2 仪器与设备 | 第64页 |
| 4.2.3 主要试剂的配制 | 第64-65页 |
| 4.3 实验设计与方法 | 第65-68页 |
| 4.3.1 实验技术路线与方法 | 第65-66页 |
| 4.3.2 胞内Ca~(2+)浓度检测条件优化实验 | 第66-67页 |
| 4.3.2.1 甜味剂溶解缓冲液的筛选 | 第66-67页 |
| 4.3.2.2 甜味剂刺激甜度范围的筛选 | 第67页 |
| 4.3.2.3 背景干扰排除实验 | 第67页 |
| 4.3.4 sucralose暴露前后甜味剂刺激的胞内Ca2+浓度变化的检测 | 第67-68页 |
| 4.3.5 数据统计分析 | 第68页 |
| 4.4 实验结果与讨论 | 第68-78页 |
| 4.4.1 甜味剂溶解缓冲液的确定 | 第68-70页 |
| 4.4.2 甜味剂刺激甜度范围的确定 | 第70-72页 |
| 4.4.3 背景干扰的排除 | 第72页 |
| 4.4.4 甜味受体蛋白表达量增加促进甜味剂刺激的胞内Ca~(2+)浓度增加 | 第72-74页 |
| 4.4.5 甜味受体是甜味信号转导的关键分子 | 第74-75页 |
| 4.4.6 甜度与胞内Ca~(2+)浓度变化的相关性 | 第75-78页 |
| 4.5 小结 | 第78-80页 |
| 第五章 总结与展望 | 第80-84页 |
| 5.1 结论 | 第80-81页 |
| 5.2 创新点 | 第81-82页 |
| 5.3 不足与展望 | 第82-84页 |
| 参考文献 | 第84-90页 |
| 附录：英文缩略表 | 第90-91页 |
| 致谢 | 第91-92页 |
