| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第一章 绪论 | 第12-33页 |
| 1.1 多不饱和脂肪酸的简介 | 第12-13页 |
| 1.2 多不饱和脂肪酸的代谢途径 | 第13-14页 |
| 1.3 多不饱和脂肪酸的生物学功能 | 第14-17页 |
| 1.3.1 对机体免疫功能的影响 | 第14-15页 |
| 1.3.2 对癌症的影响 | 第15-16页 |
| 1.3.3 对心血管疾病的影响 | 第16页 |
| 1.3.4 对生长发育的影响 | 第16-17页 |
| 1.3.5 抗氧化 | 第17页 |
| 1.3.6 增强脂类代谢,预防心脑血管疾病 | 第17页 |
| 1.3.7 抗炎 | 第17页 |
| 1.4 对微生物进行代谢工程改造生产多不饱和脂肪酸 | 第17-20页 |
| 1.5 类胡萝卜素的简介 | 第20-22页 |
| 1.6 酵母中类胡萝卜素生物合成途径 | 第22-23页 |
| 1.7 类胡萝卜素生理作用 | 第23-28页 |
| 1.7.1 番茄红素 | 第24-25页 |
| 1.7.2 β-胡萝卜素 | 第25-26页 |
| 1.7.3 虾青素 | 第26-27页 |
| 1.7.4 叶黄素 | 第27页 |
| 1.7.5 岩藻黄素 | 第27-28页 |
| 1.8 基因工程手段提高酵母类胡萝卜素产量 | 第28-29页 |
| 1.9 研究背景及意义 | 第29-32页 |
| 1.10 技术路线 | 第32-33页 |
| 第二章 ORF2基因表达对红冬孢酵母YM25235抗环境胁迫的影响 | 第33-75页 |
| 2.1 材料 | 第33-35页 |
| 2.1.1 菌种与质粒 | 第33页 |
| 2.1.2 主要试剂和培养基 | 第33-34页 |
| 2.1.3 引物合成和测序 | 第34-35页 |
| 2.2 方法 | 第35-56页 |
| 2.2.1 ORF2基因的克隆 | 第35-37页 |
| 2.2.2 pRH2034ORF2重组质粒构建 | 第37-39页 |
| 2.2.3 重组质粒pRHORF2转化红冬孢酵母YM25235菌株 | 第39-41页 |
| 2.2.4 红冬孢酵母YM25235转化子的验证 | 第41-43页 |
| 2.2.5 ORF2基因表达对YM25235抗环境胁迫活性的影响 | 第43-44页 |
| 2.2.6 ORF2基因表达对YM25235抗胁迫活性相关基因转录水平的影响 | 第44-45页 |
| 2.2.7 ORF2基因表达对YM25235中PUFAs合成的影响 | 第45-47页 |
| 2.2.8 ORF2蛋白与红冬孢酵母YM25235RKD12启动子相互作用的研究 | 第47-56页 |
| 2.2.8.1 ORF2 基因的克隆 | 第47-48页 |
| 2.2.8.2 原核表达载体pET32a-ORF2的构建 | 第48-50页 |
| 2.2.8.3 重组质粒pET32a-ORF2在大肠杆菌BL21中的表达 | 第50-51页 |
| 2.2.8.4 pET32aORF2转BL21转化子验证 | 第51页 |
| 2.2.8.5 ORF2蛋白的表达与纯化 | 第51-52页 |
| 2.2.8.6 ORF2蛋白与RKD12p相互作用验证 | 第52-54页 |
| 2.2.8.7 电泳 | 第54页 |
| 2.2.8.8 转膜 | 第54-55页 |
| 2.2.8.9 交联 | 第55页 |
| 2.2.8.10 化学发光法检测生物素标记的探针 | 第55-56页 |
| 2.3 结果与分析 | 第56-72页 |
| 2.3.1 ORF2基因序列的扩增 | 第56-57页 |
| 2.3.2 重组质粒pRHORF2的构建 | 第57-58页 |
| 2.3.3 重组质粒转农杆菌LBA4404转化子的验证 | 第58-59页 |
| 2.3.4 红冬孢酵母YM25235转化子的验证 | 第59-60页 |
| 2.3.5 ORF2基因表达对红冬孢酵母YM25235高盐胁迫及高渗透压胁迫耐受性的影响分析 | 第60-64页 |
| 2.3.5.1 ORF2 基因表达促进 YM25235 菌株的高盐环境胁迫耐受性 | 第60-61页 |
| 2.3.5.2 ORF2 基因表达促进 YM25235 菌株的高渗透压环境胁迫耐受性 | 第61-62页 |
| 2.3.5.3 ORF2基因表达促进YM25235菌株的低温环境胁迫耐受性 | 第62-63页 |
| 2.3.5.4 ORF2 基因表达促进 YM25235/pRHORF2 菌株甘油的合成 | 第63-64页 |
| 2.3.6 ORF2 基因表达对 YM25235 抗胁迫活性相关基因转录水平的影响 | 第64-66页 |
| 2.3.7 ORF2基因对YM25235/pRHORF2菌株脂肪酸合成的影响 | 第66-69页 |
| 2.3.8 ORF2蛋白与红冬孢酵母YM25235RKD12启动子相互作用的研究 | 第69-72页 |
| 2.3.8.1 重组质粒 pET32a-ORF2 的构建 | 第69-70页 |
| 2.3.8.2 重组质粒转化大肠杆菌BL21转化子的验证 | 第70页 |
| 2.3.8.3 ORF2蛋白的诱导表达与纯化 | 第70-71页 |
| 2.3.8.4 ORF2蛋白与RKD12启动子的相互作用 | 第71-72页 |
| 2.4 讨论 | 第72-75页 |
| 第三章 ORF2基因表达对红冬孢酵母YM25235中油脂和类胡萝卜素合成的影响 | 第75-91页 |
| 3.1 材料 | 第75-76页 |
| 3.1.1 菌种与质粒 | 第75页 |
| 3.1.2 主要试剂和培养基 | 第75页 |
| 3.1.3 引物合成和测序 | 第75-76页 |
| 3.2 方法 | 第76-80页 |
| 3.2.1 ORF2基因对YM25235/pRHORF2菌株油脂合成的影响 | 第76-78页 |
| 3.2.2 ORF2基因对YM25235/pRHORF2菌株类胡萝卜素合成的影响 | 第78-80页 |
| 3.3 结果与分析 | 第80-88页 |
| 3.3.1 ORF2基因对YM25235/pRHORF2菌株油脂合成的影响 | 第80-84页 |
| 3.3.2 ORF2基因对转基因菌株类胡萝卜素合成的影响 | 第84-88页 |
| 3.4 讨论 | 第88-91页 |
| 第四章 总结与展望 | 第91-93页 |
| 致谢 | 第93-94页 |
| 附录A 攻读硕士学位期间发表论文 | 第94-95页 |
| 附录B 实验所用溶液配方 | 第95-96页 |
| 附录C 实验主要仪器 | 第96-97页 |
| 参考文献 | 第97-106页 |
