| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 1 前言 | 第10-15页 |
| 1.1 选题来源 | 第10页 |
| 1.2 天冬氨酸激酶概述 | 第10-11页 |
| 1.2.1 氨基酸代谢途径中的天冬氨酸激酶 | 第10-11页 |
| 1.2.2 不同天冬氨酸激酶的调节方式 | 第11页 |
| 1.3 微生物中天冬氨酸激酶的研究历程 | 第11-13页 |
| 1.3.1 国外关于AK的研究进展 | 第11-12页 |
| 1.3.2 国内关于AK的研究进展 | 第12-13页 |
| 1.4 天冬氨酸激酶的基本结构及抑制机制 | 第13-14页 |
| 1.5 研究内容 | 第14页 |
| 1.6 研究目的和创新点 | 第14-15页 |
| 2 材料与方法 | 第15-24页 |
| 2.1 试验材料 | 第15-17页 |
| 2.1.1 菌种及质粒 | 第15页 |
| 2.1.2 主要试剂及材料 | 第15-16页 |
| 2.1.3 培养基、常用缓冲液及储存液的配制 | 第16页 |
| 2.1.4 实验仪器 | 第16-17页 |
| 2.2 试验方法 | 第17-24页 |
| 2.2.1 应用生物信息学确定突变位点 | 第17-18页 |
| 2.2.2 质粒pET-28a-AK提取 | 第18页 |
| 2.2.3 定点饱和突变 | 第18-19页 |
| 2.2.4 感受态细胞E. coli BL21制备及消化后质粒的转化 | 第19页 |
| 2.2.5 突变株的高通量筛选 | 第19-20页 |
| 2.2.6 AK粗酶液制备 | 第20页 |
| 2.2.7 AK纯化液制备 | 第20-21页 |
| 2.2.8 Native-PAGE和SDS-PAGE验证 | 第21-22页 |
| 2.2.9 蛋白印迹 | 第22页 |
| 2.2.10 AK动力学分析 | 第22-23页 |
| 2.2.11 AK酶学性质研究 | 第23-24页 |
| 3 结果与分析 | 第24-42页 |
| 3.1 A297，D312，Q316位点的确定 | 第24-26页 |
| 3.2 突变菌株AK基因核酸电泳验证 | 第26-27页 |
| 3.3 突变后AK测序结果 | 第27页 |
| 3.4 AK的Native-PAGE，SDS-PAGE及Western blot验证 | 第27-28页 |
| 3.5 野生型和突变体AK动力学分析 | 第28-32页 |
| 3.6 A297K AK、D312I AK和Q316A AK的反应pH、温度及热稳定性研究 | 第32-35页 |
| 3.7 底物抑制剂、金属离子和有机溶剂对突变前后AK活力影响的研究 | 第35-42页 |
| 3.7.1 底物抑制剂对突变前后AK活力的影响 | 第35-37页 |
| 3.7.2 金属离子对突变前后AK活力的影响 | 第37-39页 |
| 3.7.3 有机溶剂对突变前后AK活力的影响 | 第39-42页 |
| 4 讨论 | 第42-48页 |
| 4.1 A297K AK | 第42-44页 |
| 4.2 D312I AK | 第44-46页 |
| 4.3 Q316A AK | 第46-48页 |
| 5 结论 | 第48-50页 |
| 参考文献 | 第50-55页 |
| 作者简介 | 第55-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
