| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 1 绪言 | 第12-22页 |
| ·β-甘露聚糖酶的来源 | 第12-13页 |
| ·微生物β-甘露聚糖酶 | 第12-13页 |
| ·植物β-甘露聚糖酶 | 第13页 |
| ·动物β-甘露聚糖酶 | 第13页 |
| ·β-甘露聚糖酶的研究进展 | 第13-18页 |
| ·微生物β-甘露聚糖酶的研究进展 | 第14-16页 |
| ·植物β-甘露聚糖酶的研究进展 | 第16-17页 |
| ·动物β-甘露聚糖酶的研究进展 | 第17-18页 |
| ·甘露聚糖酶及其水解产物的应用 | 第18-20页 |
| ·在医药领域中的的应用 | 第18-19页 |
| ·在食品工业中的应用 | 第19页 |
| ·在饲料工业中的的应用 | 第19-20页 |
| ·在造纸工业中的应用 | 第20页 |
| ·在石油压裂破胶中的应用 | 第20页 |
| ·研究展望 | 第20页 |
| ·本研究的目的意义 | 第20-21页 |
| ·本研究的主要内容和技术路线 | 第21-22页 |
| 2 β-甘露聚糖酶基因的克隆及分析 | 第22-48页 |
| ·材料与试剂 | 第22-23页 |
| ·菌株 | 第22页 |
| ·工具酶及主要试剂 | 第22-23页 |
| ·实验方法 | 第23-30页 |
| ·枯草杆菌A33菌总DNA的提取 | 第23-24页 |
| ·简并PCR扩增β-甘露聚糖酶基因的中间保守片段 | 第24-28页 |
| ·β-甘露聚糖酶全长基因序列的克隆 | 第28-30页 |
| ·实验结果与分析 | 第30-44页 |
| ·枯草杆菌A33菌总DNA的提取 | 第30页 |
| ·β-甘露聚糖酶基因中间保守片段的克隆 | 第30-31页 |
| ·β-甘露聚糖酶基因全长序列的克隆 | 第31-32页 |
| ·β-甘露聚糖酶基因(manA)的生物信息学分析 | 第32-44页 |
| ·讨论 | 第44-48页 |
| ·关于PCR技术克隆目的基因的探讨 | 第44-46页 |
| ·关于生物信息学方法的探讨 | 第46-48页 |
| 3 pRSET-A-manA融合表达载体的构建及其表达与鉴定 | 第48-62页 |
| ·材料与试剂 | 第48-50页 |
| ·菌株与质粒 | 第48-49页 |
| ·工具酶及主要试剂 | 第49-50页 |
| ·实验方法 | 第50-56页 |
| ·引物设计及目的基因PCR扩增 | 第50页 |
| ·融合表达载体pRSET-A-manA的构建 | 第50-56页 |
| ·结果与分析 | 第56-60页 |
| ·表达载体pRSET-A载体的构建及鉴定 | 第56-58页 |
| ·表达载体pRSET-A-manA在大肠杆菌中的诱导表达 | 第58-60页 |
| ·β-甘露聚糖酶的生物学活性测定 | 第60页 |
| ·讨论 | 第60-62页 |
| ·表达载体的选择 | 第60页 |
| ·影响蛋白质表达的因素 | 第60-61页 |
| ·酶的本底表达 | 第61-62页 |
| 4 pQE-30-manA融合表达载体的构建及其表达与鉴定 | 第62-74页 |
| ·材料与试剂 | 第62-63页 |
| ·菌株与质粒 | 第62页 |
| ·工具酶及主要试剂 | 第62-63页 |
| ·实验方法 | 第63-67页 |
| ·引物设计及目的基因的PCR扩增 | 第63-64页 |
| ·融合表达载体pQE-30-manA的构建 | 第64-67页 |
| ·结果与分析 | 第67-71页 |
| ·pQE-30-manA表达载体的构建及鉴定 | 第67-68页 |
| ·表达载体pQE-30-manA在大肠杆菌中的诱导表达 | 第68-70页 |
| ·β-甘露聚糖酶的生物学活性测定 | 第70-71页 |
| ·讨论 | 第71-74页 |
| ·关于pQE-30质粒表达系统的讨论 | 第71-72页 |
| ·关于影响蛋白质表达因素的讨论 | 第72-73页 |
| ·pRSET-A-manA和pQE-30-manA表达的重组蛋白酶活力的比较 | 第73-74页 |
| 5 manA非融合表达及定点突变 | 第74-90页 |
| ·材料与试剂 | 第74-75页 |
| ·菌株与质粒 | 第74页 |
| ·工具酶及主要试剂 | 第74-75页 |
| ·实验方法 | 第75-80页 |
| ·引物设计及目的基因的PCR扩增 | 第75-77页 |
| ·pET-32a-manA和pET-32a-manA*的构建 | 第77-80页 |
| ·结果与分析 | 第80-87页 |
| ·pET-32a-manA和pET-32a-manA*的构建与鉴定 | 第80-82页 |
| ·pET-32a-manA和pET-32a-manA*在大肠杆菌中的诱导表达 | 第82-86页 |
| ·β-甘露聚糖酶的生物学活性测定 | 第86-87页 |
| ·讨论 | 第87-90页 |
| ·关于非融合表达 | 第87-88页 |
| ·关于PCR介导的体外突变 | 第88-90页 |
| 6 结论与创新点 | 第90-91页 |
| 参考文献 | 第91-98页 |
| 附录A:manA基因中间片段正向测序报告 | 第98-99页 |
| 附录B:manA基因中间片段反向测序报告 | 第99-100页 |
| 附录C:manA基因全长片段正向测序报告 | 第100-101页 |
| 附录D:manA基因全长片段反向测序报告 | 第101-102页 |
| 附录E:pRSET-A-manA表达载体测序报告 | 第102-103页 |
| 附录F:pET-32a-manA表达载体测序报告 | 第103-104页 |
| 附录G:pET-32a-manA*突变达载体测序报告 | 第104-105页 |
| 附录H:manA基因注册GenBank | 第105-106页 |
| 附录I:缩略词表 | 第106-107页 |
| 附录J:主要试剂配置 | 第107-110页 |
| 附录H:攻读硕士学位期间的主要学术成果 | 第110-111页 |
| 致谢 | 第111页 |
