| 摘要 | 第3-4页 |
| ABSTRACT | 第4页 |
| 第1章 文献综述 | 第8-30页 |
| 1.1 解脂酵母生产萜类化合物研究进展 | 第8-11页 |
| 1.1.1 萜类化合物简介 | 第8-9页 |
| 1.1.2 萜类化合物的合成途径和生产方式 | 第9-11页 |
| 1.2 解脂酵母底盘的研究现状 | 第11-21页 |
| 1.2.1 解脂耶氏酵母简介 | 第11-12页 |
| 1.2.2 解脂耶氏酵母生产萜类化合物的菌种改造和发酵优化策略 | 第12-13页 |
| 1.2.3 酵母产单萜化合物的研究 | 第13-15页 |
| 1.2.4 酵母中倍半萜化合物的研究 | 第15-16页 |
| 1.2.5 酵母生产二萜化合物的研究 | 第16-17页 |
| 1.2.6 酵母生产三萜化合物的研究 | 第17-18页 |
| 1.2.7 酵母生产类胡萝卜素的研究 | 第18-19页 |
| 1.2.8 酵母生产糖脂的研究 | 第19-20页 |
| 1.2.9 酵母生产生物燃料、脂质和功能性脂肪酸的研究 | 第20-21页 |
| 1.3 檀香烯简介 | 第21-24页 |
| 1.3.1 檀香油简介 | 第21-22页 |
| 1.3.2 檀香烯的结构和性质 | 第22-23页 |
| 1.3.3 檀香烯的生产方式 | 第23-24页 |
| 1.4 α-檀香烯生物合成的研究进展 | 第24-27页 |
| 1.4.1 α-檀香烯合酶编码基因的鉴定与表达 | 第24-25页 |
| 1.4.2 酿酒酵母合成α-檀香烯的研究 | 第25-26页 |
| 1.4.3 苔藓合成α-檀香烯的研究 | 第26页 |
| 1.4.4 檀香萜、醇系列倍半萜的相关研究 | 第26-27页 |
| 1.5 本文的研究内容 | 第27-30页 |
| 第2章 实验材料与方法 | 第30-50页 |
| 2.1 实验材料 | 第30-34页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第30-31页 |
| 2.1.2 药品与试剂 | 第31-33页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第33-34页 |
| 2.2 实验方法 | 第34-50页 |
| 2.2.1 大肠杆菌及解脂酵母的培养和保藏 | 第34-35页 |
| 2.2.2 培养基与溶液配制方法 | 第35-36页 |
| 2.2.3 碱裂解法抽提大肠杆菌质粒DNA | 第36-37页 |
| 2.2.4 玻璃珠法提取解脂酵母基因组DNA | 第37页 |
| 2.2.5 目的片段的PCR扩增与体外融合PCR实验 | 第37-42页 |
| 2.2.6 琼脂糖凝胶电泳法检测DNA | 第42页 |
| 2.2.7 DNA片段的纯化和胶回收 | 第42页 |
| 2.2.8 质粒的酶切与连接反应 | 第42-43页 |
| 2.2.9 大肠杆菌的感受态细胞的转化 | 第43-44页 |
| 2.2.10 解脂酵母的醋酸锂转化 | 第44页 |
| 2.2.11 大肠杆菌和解脂酵母的菌落PCR验证 | 第44-45页 |
| 2.2.12 质粒的酶切验证 | 第45页 |
| 2.2.13 鲨烯的提取和检测 | 第45-46页 |
| 2.2.14 檀香烯的提取和检测 | 第46页 |
| 2.2.15 法呢醇的提取和检测 | 第46页 |
| 2.2.16 发酵中菌体浓度和葡萄糖浓度的测定 | 第46-47页 |
| 2.2.17 摇瓶培养的条件及补料操作 | 第47页 |
| 2.2.18 5-L罐的菌种培养、发酵参数及补料操作 | 第47-50页 |
| 第3章 解脂耶氏酵母产α-檀香烯的菌株构建 | 第50-66页 |
| 3.1 引言 | 第50-51页 |
| 3.2 产α-檀香烯的菌株的初步构建 | 第51-55页 |
| 3.2.1 外源α-檀香烯合酶基因STS的密码子优化 | 第51-52页 |
| 3.2.2 外源基因STS在解脂酵母基因组的初步表达 | 第52页 |
| 3.2.3 TEF1p-STS-XPR2t表达模块的验证 | 第52-53页 |
| 3.2.4 SA-1工程菌的发酵检测及产物定性 | 第53-55页 |
| 3.3 过表达ERG20对α-檀香烯产量的负面影响 | 第55-58页 |
| 3.3.1 TEF1p-STS-XPR2t、EXP1p-ERG20-LIP2t表达模块的构建及验证 | 第55-56页 |
| 3.3.2 pERG20质粒的构建及验证 | 第56-57页 |
| 3.3.3 SA-2和SA-3工程菌的发酵检测 | 第57-58页 |
| 3.4 过表达MVA上游途径的系列基因 | 第58-60页 |
| 3.4.1 MVA上游途径7个基因的过表达质粒构建及验证 | 第58-60页 |
| 3.4.2 SA-4到SA-10的7株工程菌发酵检测 | 第60页 |
| 3.5 过表达ERG8和HMG1 | 第60-65页 |
| 3.5.1 ERG8或HMG1单基因多拷贝表达模块的构建及验证 | 第61页 |
| 3.5.2 HMG1-ERG8多拷贝共表达模块的构建及验证 | 第61-62页 |
| 3.5.3 pERG8HMG1质粒的构建及验证 | 第62-63页 |
| 3.5.4 SA-11和12工程菌的发酵检测 | 第63-64页 |
| 3.5.5 SA-13和14工程菌的发酵检测 | 第64-65页 |
| 3.6 本章小结 | 第65-66页 |
| 第4章 生产α-檀香烯工程菌的发酵过程优化 | 第66-78页 |
| 4.1 引言 | 第66页 |
| 4.2 正十二烷添加对发酵过程的影响 | 第66-71页 |
| 4.2.1 正十二烷的添加对SA-13菌株生长的影响 | 第66-68页 |
| 4.2.2 正十二烷的添加量对产物α-檀香烯积累的影响 | 第68页 |
| 4.2.3 正十二烷添加时间对产物α-檀香烯积累的影响 | 第68-70页 |
| 4.2.4 双相发酵持续时间对产物α-檀香烯积累的影响 | 第70-71页 |
| 4.3 碳源优化及摇瓶补料实验 | 第71-74页 |
| 4.3.1 摇瓶发酵的碳源浓度优化 | 第71-72页 |
| 4.3.2 摇瓶补料发酵的5种补料策略 | 第72-74页 |
| 4.4 5-L罐单批发酵与分批补料发酵 | 第74-77页 |
| 4.5 本章小结 | 第77-78页 |
| 第5章 结论与展望 | 第78-80页 |
| 5.1 结论 | 第78-79页 |
| 5.2 展望 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-88页 |
| 发表论文情况说明 | 第88-90页 |
| 致谢 | 第90页 |
