| 摘要 | 第3-4页 |
| abstract | 第4页 |
| 第1章 文献综述 | 第8-22页 |
| 1.1 引言 | 第8页 |
| 1.2 Nisin应用进展 | 第8-9页 |
| 1.3 耐酸机制的研究 | 第9-12页 |
| 1.3.1 调控胞内pH稳定机制 | 第10-11页 |
| 1.3.2 大分子保护及DNA修复机制 | 第11-12页 |
| 1.3.3 细胞膜和细胞壁的保护 | 第12页 |
| 1.4 细胞壁研究进展 | 第12-20页 |
| 1.4.1 细胞壁组成成分及结构研究进展 | 第12-13页 |
| 1.4.2 肽聚糖研究进展 | 第13-20页 |
| 1.5 本论文主要研究内容及意义 | 第20-22页 |
| 第2章 RacD通过感知pH变化调控D-Asp合成影响肽聚糖结构 | 第22-44页 |
| 2.1 引言 | 第22页 |
| 2.2 实验材料 | 第22-25页 |
| 2.2.1 培养基和试剂 | 第22-23页 |
| 2.2.2 实验药品及仪器 | 第23-24页 |
| 2.2.3 供试菌株和质粒 | 第24-25页 |
| 2.3 实验方法 | 第25-35页 |
| 2.3.1 RacD和AslA体外表达菌株构建 | 第25-28页 |
| 2.3.2 乳酸乳球生长曲线测定 | 第28-29页 |
| 2.3.3 PG的提取及测定 | 第29-30页 |
| 2.3.4 细胞内氨基酸的定量 | 第30-31页 |
| 2.3.5 RacD-His和AslA-His蛋白纯化 | 第31页 |
| 2.3.6 酶活性的测量和动力学参数的测定 | 第31-32页 |
| 2.3.7 体外合成肽聚糖前体(UDP-MurNAc-五肽-D-Asp) | 第32-33页 |
| 2.3.8 胞内pH(pHi)的测定 | 第33-34页 |
| 2.3.9 iTRAQ标记的蛋白质组学测定 | 第34-35页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第35-42页 |
| 2.4.1 不同培养pH条件对PG结构影响 | 第35-36页 |
| 2.4.2 不同培养pH下D-/L-As含量变化 | 第36-37页 |
| 2.4.3 pH对RacD和AslA表达量的影响 | 第37页 |
| 2.4.4 pH对RacD和AslA酶活的影响 | 第37-39页 |
| 2.4.5 PG前体(UDP-MurNAc-五肽-D-Asp)的体外合成 | 第39-40页 |
| 2.4.6 RacD酶活动力学 | 第40-41页 |
| 2.4.7 动力学角度分析pH对RacD酶活影响参数 | 第41-42页 |
| 2.5 本章小结 | 第42-44页 |
| 第3章 PG O-乙酰化和N-去乙酰化修饰对肽聚糖结构及酸耐受的影响 | 第44-64页 |
| 3.1 引言 | 第44-45页 |
| 3.2 实验材料 | 第45-47页 |
| 3.2.1 培养基和试剂 | 第45-46页 |
| 3.2.2 实验药品及仪器 | 第46-47页 |
| 3.2.3 供试菌株和质粒 | 第47页 |
| 3.3 实验方法 | 第47-55页 |
| 3.3.1 xynD和yvhB过表达菌株构建 | 第47-50页 |
| 3.3.2 xynD和yvhB缺失菌株的构建 | 第50-51页 |
| 3.3.3 xynD和yvhB共表达菌株构建 | 第51页 |
| 3.3.4 AcmA体外表达 | 第51-52页 |
| 3.3.5 细胞壁肽聚糖提取与结构鉴定 | 第52页 |
| 3.3.6 菌体的自溶实验 | 第52页 |
| 3.3.7 溶菌酶和AcmA介导的细菌水解实验 | 第52-53页 |
| 3.3.8 溶菌酶和AcmA介导的PG水解实验 | 第53页 |
| 3.3.9 酸耐受实验 | 第53页 |
| 3.3.10 乳酸乳球菌分批发酵发酵及nisin效价测定 | 第53-54页 |
| 3.3.11 乳酸乳球菌补料-分批发酵发酵及nisin效价测定 | 第54页 |
| 3.3.12 nisin吸附率的测定 | 第54-55页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第55-62页 |
| 3.4.1 YvhB、XynD分别催化O-Ac-M和N-deAc-G | 第55-56页 |
| 3.4.2 提高O-Ac-M和N-deAc-G水平有助于菌体抵抗裂解 | 第56-57页 |
| 3.4.3 O-Ac-M和N-deAc-G有助于提高细胞壁稳定性 | 第57-58页 |
| 3.4.4 O-Ac-M和N-deAc-G提高菌体的酸耐受性 | 第58-60页 |
| 3.4.5 提高O-Ac-M和N-deAc-G水平促进nisin产量提高 | 第60-62页 |
| 3.4.6 同时提高O-Ac-M和N-deAc-G水平进一步提升菌体特性 | 第62页 |
| 3.5 本章小结 | 第62-64页 |
| 第4章 结论与展望 | 第64-66页 |
| 4.1 结论 | 第64-65页 |
| 4.2 展望 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-78页 |
| 发表论文情况说明 | 第78-80页 |
| 致谢 | 第80页 |
