| 摘要 | 第3-4页 |
| abstract | 第4页 |
| 第1章 文献综述 | 第9-21页 |
| 1.1 引言 | 第9页 |
| 1.2 Nisin的研究进展 | 第9-11页 |
| 1.2.1 Nisin合成基因簇的研究进展 | 第9-10页 |
| 1.2.2 Nisin抑菌作用的研究进展 | 第10-11页 |
| 1.3 乳酸乳球菌nisin耐受机制的研究进展 | 第11-13页 |
| 1.3.1 Nisin免疫蛋白NisI的研究进展 | 第12-13页 |
| 1.3.2 Nisin免疫蛋白NisFEG的研究进展 | 第13页 |
| 1.4 脂蛋白的研究进展 | 第13-19页 |
| 1.4.1 革兰氏阳性菌脂蛋白的功能研究 | 第14-16页 |
| 1.4.2 脂蛋白生物合成的研究进展 | 第16-18页 |
| 1.4.3 Lgt和 LspA对于革兰氏阳性菌生理活性的影响 | 第18-19页 |
| 1.5 本文的主要研究内容与实验设计 | 第19-21页 |
| 第2章 过表达LspA对乳酸乳球菌nisin产量的影响 | 第21-35页 |
| 2.1 引言 | 第21页 |
| 2.2 实验材料 | 第21-24页 |
| 2.2.1 菌株和质粒 | 第21页 |
| 2.2.2 设备与仪器 | 第21-22页 |
| 2.2.3 实验试剂与药品 | 第22-23页 |
| 2.2.4 培养基 | 第23-24页 |
| 2.3 实验方法 | 第24-31页 |
| 2.3.1 基因的获取和引物设计 | 第24-25页 |
| 2.3.2 基因组和质粒的提取基因的扩增 | 第25页 |
| 2.3.3 目标基因的扩增和回收 | 第25-26页 |
| 2.3.4 载体与目标片段的酶切回收及连接 | 第26-27页 |
| 2.3.5 大肠杆菌TG1 的感受态细胞制备及化学转化 | 第27-28页 |
| 2.3.6 转化子的筛选和验证 | 第28-29页 |
| 2.3.7 乳酸乳球菌感受态细胞的制备和电转化 | 第29-30页 |
| 2.3.8 乳酸乳球菌的发酵实验 | 第30-31页 |
| 2.3.9 形态研究 | 第31页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第31-34页 |
| 2.4.1 LspA的过表达对乳酸乳球菌nisin产量的影响 | 第31-32页 |
| 2.4.2 LspA的过表达对乳酸乳球菌菌体量的影响 | 第32-33页 |
| 2.4.3 LspA的表达对乳酸乳球菌发酵过程中发酵液pH值的影响 | 第33页 |
| 2.4.4 LspA的表达对乳酸乳球菌菌体形态的影响 | 第33-34页 |
| 2.5 小结 | 第34-35页 |
| 第3章 利用同源双交换系统对基因lspA的敲除及其功能研究 | 第35-47页 |
| 3.1 引言 | 第35页 |
| 3.2 实验材料 | 第35-36页 |
| 3.2.1 菌株和质粒 | 第35页 |
| 3.2.2 仪器和设备 | 第35-36页 |
| 3.2.3 实验试剂与药品 | 第36页 |
| 3.2.4 培养基 | 第36页 |
| 3.3 实验方法 | 第36-42页 |
| 3.3.1 对基因lspA的敲除PCR引物设计及验证 | 第36-37页 |
| 3.3.2 质粒pNZ5319 的提取 | 第37-38页 |
| 3.3.3 同源臂基因的扩增和回收 | 第38-39页 |
| 3.3.4 质粒pNZ5319 与目标同源臂的酶切回收及连接 | 第39-40页 |
| 3.3.5 大肠杆菌TG1 的感受态细胞制备及化学转化 | 第40页 |
| 3.3.6 转化子的筛选和验证 | 第40页 |
| 3.3.7 乳酸乳球菌感受态细胞的电转化以及单、双交换菌株的筛选 | 第40-41页 |
| 3.3.8 将pNZTS-Cre质粒导入双交换菌株消除抗性基因 | 第41-42页 |
| 3.3.9 乳酸乳球菌F44 缺失菌株的测序鉴定 | 第42页 |
| 3.3.10 LspA缺失菌株的发酵实验 | 第42页 |
| 3.3.11 形态研究 | 第42页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第42-45页 |
| 3.4.1 lspA基因的缺失对乳酸乳球菌nisin产量的影响 | 第42-43页 |
| 3.4.2 lspA基因的缺失对乳酸乳球菌菌体量的影响 | 第43-44页 |
| 3.4.3 lspA基因的缺失对乳酸乳球菌发酵过程中发酵液pH值的影响. | 第44页 |
| 3.4.4 lspA基因的缺失对乳酸乳球菌菌体形态的影响 | 第44-45页 |
| 3.5 小结 | 第45-47页 |
| 第4章 NisI和 LspA对乳酸乳球菌nisin产量及nisin耐受性的影响 | 第47-59页 |
| 4.1 引言 | 第47页 |
| 4.2 实验材料 | 第47-48页 |
| 4.2.1 菌株和质粒 | 第47页 |
| 4.2.2 仪器和设备 | 第47-48页 |
| 4.2.3 实验试剂与药品 | 第48页 |
| 4.2.4 培养基 | 第48页 |
| 4.3 实验方法 | 第48-52页 |
| 4.3.1 基因的获取和引物设计 | 第48-49页 |
| 4.3.2 基因组和质粒的提取基因的扩增 | 第49页 |
| 4.3.3 目标基因的扩增和回收 | 第49-50页 |
| 4.3.4 载体与目标片段的酶切回收及连接 | 第50-51页 |
| 4.3.5 大肠杆菌TG1 的感受态细胞制备及化学转化 | 第51页 |
| 4.3.6 转化子的筛选和验证 | 第51页 |
| 4.3.7 乳酸乳球菌感受态细胞的制备和电转化 | 第51页 |
| 4.3.8 乳酸乳球菌的发酵实验 | 第51-52页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第52-58页 |
| 4.4.1 NisI的过表达对乳酸乳球菌nisin产量的影响 | 第52页 |
| 4.4.2 NisI的过表达对乳酸乳球菌菌体量的影响 | 第52-53页 |
| 4.4.3 NisI的过表达对乳酸乳球菌发酵过程中发酵液pH值的影响 | 第53-54页 |
| 4.4.4 NisI和 LspA的串联表达对乳酸乳球菌nisin产量的影响 | 第54-55页 |
| 4.4.5 NisI和 LspA的串联表达对乳酸乳球菌菌体量的影响 | 第55页 |
| 4.4.6 NisI和 LspA的串联表达对乳酸乳球菌发酵过程中发酵液pH值的影响 | 第55-56页 |
| 4.4.7 各个菌株在不同nisin浓度的液体培养基的生长情况 | 第56-57页 |
| 4.4.8 各个菌株在不同nisin浓度的固体培养基平板的生长情况 | 第57-58页 |
| 4.5 小结 | 第58-59页 |
| 第5章 LspA在 NisI生物合成过程中的作用 | 第59-77页 |
| 5.1 引言 | 第59页 |
| 5.2 实验材料 | 第59-61页 |
| 5.2.1 菌株和质粒 | 第59页 |
| 5.2.2 仪器和设备 | 第59-60页 |
| 5.2.3 实验试剂与药品 | 第60页 |
| 5.2.4 培养基和试剂溶液 | 第60-61页 |
| 5.3 实验方法 | 第61-69页 |
| 5.3.1 基因的获取和引物设计 | 第61-62页 |
| 5.3.2 基因组和质粒的提取基因的扩增 | 第62页 |
| 5.3.3 目标基因的扩增和回收 | 第62页 |
| 5.3.4 载体与目标片段的酶切回收及连接 | 第62页 |
| 5.3.5 大肠杆菌TG1 的感受态细胞制备及化学转化 | 第62-63页 |
| 5.3.6 大肠杆菌BL21(DE3)的感受态细胞制备及电转化 | 第63-64页 |
| 5.3.7 SDS-PAGE操作 | 第64-65页 |
| 5.3.8 蛋白的表达与纯化 | 第65-67页 |
| 5.3.9 LspA体外酶活验证 | 第67-68页 |
| 5.3.10 LspA体内酶活验证 | 第68-69页 |
| 5.4 结果与讨论 | 第69-76页 |
| 5.4.1 NisI前体蛋白的诱导表达结果分析 | 第69-71页 |
| 5.4.2 Lgt蛋白的诱导表达结果分析 | 第71-73页 |
| 5.4.3 LspA蛋白的诱导表达结果分析 | 第73-74页 |
| 5.4.4 LspA体外酶活验证的结果分析 | 第74-75页 |
| 5.4.5 LspA体内酶活验证的结果分析 | 第75-76页 |
| 5.5 小结 | 第76-77页 |
| 第6章 结论与展望 | 第77-79页 |
| 6.1 结论 | 第77-78页 |
| 6.2 展望 | 第78-79页 |
| 参考文献 | 第79-85页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第85-87页 |
| 致谢 | 第87页 |
