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多倍体酵母合成型V号染色体的重排

摘要第3-4页
ABSTRACT第4页
第1章 文献综述第8-16页
    1.1 酿酒酵母基因组合成计划(Sc2.0)第8页
    1.2 酿酒酵母的交配型及倍性第8-12页
        1.2.1 酿酒酵母的交配型及其转换第8-10页
        1.2.2 多倍体现象及多倍体酵母第10-11页
        1.2.3 非整倍体现象及非整倍体酵母第11-12页
    1.3 基因组重排SCRaMbLE系统第12-13页
        1.3.1 SCRaMbLE系统简介第12页
        1.3.2 SCRaMbLE系统在合成酵母染色体中的应用第12-13页
    1.4 本课题的主要研究内容及意义第13-16页
第2章 材料与方法第16-30页
    2.1 实验材料第16-21页
        2.1.1 实验菌株及质粒第16页
        2.1.2 实验仪器第16-17页
        2.1.3 实验试剂第17-19页
        2.1.4 实验试剂配制第19-21页
    2.2 分子操作方法第21-24页
        2.2.1 CRISPR质粒构建方法第22页
        2.2.2 酵母质粒丢失方法第22-23页
        2.2.3 酿酒酵母基因组提取方法第23页
        2.2.4 实时荧光定量PCR方法第23-24页
    2.3 酿酒酵母生孢拆孢方法第24-25页
    2.4 酿酒酵母融合方法第25页
    2.5 酵母菌株交配型验证方法第25-26页
        2.5.1 PCR验证方法第25页
        2.5.2 tester菌验证方法第25-26页
    2.6 半乳糖诱导删除酵母染色体方法第26-27页
    2.7 流式细胞仪验证酵母的倍型第27页
    2.8 酵母菌株SCRaMbLE第27-28页
    2.9 酵母菌株发酵及产物检测方法第28-30页
        2.9.1 菌株发酵方法第28页
        2.9.2 玉米黄质的提取方法第28页
        2.9.3 玉米黄质的检测方法第28-30页
第3章 酵母交配型转换第30-46页
    3.1 引言第30-31页
    3.2 酵母交配型转换所需质粒的构建第31-33页
        3.2.1 gRNA表达质粒的构建第31-32页
        3.2.2 Donor DNA质粒的构建第32-33页
    3.3 MATa质粒的构建第33页
    3.4 CRISPR方法转换酵母交配型的效率第33-37页
        3.4.1 gRNA表达质粒的优化第33-36页
        3.4.2 CRISPR方法转换单倍体酵母交配型的效率第36-37页
    3.5 含多条合成型染色体的单倍体酵母菌株的构建第37-40页
        3.5.1 含多条合成型染色体的单倍体酵母菌株的构建第37-38页
        3.5.2 含多条合成型染色体的单倍体酵母菌株的验证第38-39页
        3.5.3 synV/synX单倍体酵母菌株的表征第39-40页
    3.6 多倍体酵母菌株的构建及验证第40-44页
        3.6.1 CRISPR方法转换二倍体酵母交配型的效率第40-41页
        3.6.2 野生型多倍体酵母菌株的构建第41-42页
        3.6.3 synV多倍体酵母菌株的构建第42-43页
        3.6.4 synV/synX多倍体酵母菌株的构建第43-44页
    3.7 小结第44-46页
第4章 产玉米黄质多倍体酵母菌株的构建及重排第46-64页
    4.1 引言第46页
    4.2 玉米黄质整合质粒的构建第46-48页
        4.2.1 玉米黄质表达盒的构建第46-47页
        4.2.2 整合同源臂的构建第47-48页
    4.3 产玉米黄质酵母菌株的构建第48-53页
        4.3.1 产玉米黄质野生型酵母菌株的构建第48-49页
        4.3.2 产玉米黄质合成型酵母菌株的构建第49-53页
    4.4 合成型玉米黄质酵母菌株SCRaMbLE第53-56页
        4.4.1 合成型玉米黄质多倍体酵母的重排第53-54页
        4.4.2 重排条件优化第54-56页
    4.5 重排菌株发酵及产量测定第56-58页
        4.5.1 SCRaMbLE后表型明显提升的菌株发酵第57-58页
        4.5.2 玉米黄质的提取及HPLC测定第58页
    4.6 PCRTag检测酵母染色体的变化第58-59页
    4.7 qPCR验证基因拷贝数的变化第59-61页
    4.8 重排菌株的传代稳定性第61页
    4.9 小结第61-64页
第5章 产玉米黄质非整倍体酵母菌株的构建第64-70页
    5.1 引言第64页
    5.2 产玉米黄质重排酵母菌株的减数分裂第64-66页
        5.2.1 重排玉米黄质酵母菌株生孢第64-65页
        5.2.2 孢子倍型验证第65-66页
    5.3 PCRTag检测酵母染色体的变化第66-67页
    5.4 孢子发酵及产量HPLC检测第67-68页
    5.5 qPCR验证1.5倍体孢子的基因拷贝数第68页
    5.6 1.5倍体孢子的传代稳定性第68-69页
    5.7 小结第69-70页
第6章 结论与展望第70-72页
    6.1 结论第70-71页
    6.2 展望第71-72页
参考文献第72-78页
附录A第78-86页
发表论文和参加科研情况说明第86-88页
致谢第88页

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