| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 第一章 绪论 | 第17-25页 |
| 1.1 燃料乙醇的发展现状 | 第17-18页 |
| 1.2 乙醇的生物发酵法 | 第18-20页 |
| 1.2.1 乙醇发酵常用菌株 | 第18-19页 |
| 1.2.2 酿酒酵母发酵途径 | 第19-20页 |
| 1.3 发酵过程中的乙醇胁迫 | 第20页 |
| 1.4 乙醇胁迫下海藻糖对酿酒酵母的保护 | 第20-21页 |
| 1.4.1 海藻糖简介 | 第20-21页 |
| 1.4.2 海藻糖与酵母乙醇耐受性的关系 | 第21页 |
| 1.5 乙醇胁迫下热激蛋白对酿酒酵母的保护 | 第21-22页 |
| 1.5.1 热激蛋白简介 | 第21页 |
| 1.5.2 热激蛋白与酵母乙醇耐受性的关系 | 第21-22页 |
| 1.6 酿酒酵母基因工程改造 | 第22-23页 |
| 1.6.1 重组酵母的转化方法 | 第22页 |
| 1.6.2 重组酵母的筛选方法 | 第22-23页 |
| 1.7 本课题的研究工作 | 第23-25页 |
| 1.7.1 本课题的研究意义 | 第23页 |
| 1.7.2 本课题的研究内容 | 第23-25页 |
| 第二章 乙醇胁迫下酿酒酵母海藻糖和热激蛋白的表达 | 第25-41页 |
| 2.1 引言 | 第25页 |
| 2.2 实验材料与设备 | 第25-26页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第25页 |
| 2.2.2 培养基配制 | 第25-26页 |
| 2.2.3 主要仪器设备 | 第26页 |
| 2.3 实验方法 | 第26-32页 |
| 2.3.1 不同浓度乙醇胁迫下酿酒酵母生长情况的测定 | 第26-27页 |
| 2.3.2 不同浓度乙醇胁迫下酿酒酵母麦角固醇的测定 | 第27-28页 |
| 2.3.3 不同浓度乙醇胁迫下酿酒酵母海藻糖的测定 | 第28页 |
| 2.3.4 qPCR测定海藻糖与热激蛋白相关基因的表达量 | 第28-32页 |
| 2.4 实验结果 | 第32-38页 |
| 2.4.1 不同浓度乙醇胁迫下酿酒酵母的生长情况 | 第32-34页 |
| 2.4.2 不同浓度乙醇胁迫下发酵液的pH | 第34-35页 |
| 2.4.3 不同浓度乙醇胁迫下胞内麦角固醇的含量 | 第35-36页 |
| 2.4.4 不同浓度乙醇胁迫下酿酒酵母胞内海藻糖的含量 | 第36-37页 |
| 2.4.5 麦角固醇与海藻糖相关性分析 | 第37页 |
| 2.4.6 不同浓度乙醇胁迫下海藻糖与热激蛋白相关基因的表达量 | 第37-38页 |
| 2.5 本章小结 | 第38-41页 |
| 第三章 tps2与hsp104串联共表达载体的构建 | 第41-65页 |
| 3.1 引言 | 第41页 |
| 3.2 实验材料与设备 | 第41-43页 |
| 3.2.1 材料 | 第41页 |
| 3.2.2 培养基配制 | 第41-42页 |
| 3.2.3 主要试剂 | 第42页 |
| 3.2.4 主要仪器设备 | 第42-43页 |
| 3.3 实验方法 | 第43-56页 |
| 3.3.1 PCR扩增目的基因tps2和hsp104 | 第43-45页 |
| 3.3.2 琼脂糖凝胶电泳验证PCR产物 | 第45页 |
| 3.3.3 PCR产物纯化 | 第45-46页 |
| 3.3.4 目的基因和质粒双酶切 | 第46-47页 |
| 3.3.5 双酶切产物跑胶验证与胶回收 | 第47页 |
| 3.3.6 tps2与hsp104重组质粒的构建 | 第47-50页 |
| 3.3.7 tps2与hsp104重组质粒的转化 | 第50页 |
| 3.3.8 tps2与hsp104重组转化子筛选 | 第50-52页 |
| 3.3.9 tps2与hsp104串联共表达载体的构建 | 第52-56页 |
| 3.4 实验结果 | 第56-62页 |
| 3.4.1 PCR扩增目的基因tps2和hsp104 | 第56-57页 |
| 3.4.2 tps2与hsp104重组子PCR筛选验证 | 第57-58页 |
| 3.4.3 tps2与hsp104重组子双酶切验证 | 第58-59页 |
| 3.4.4 tps2与hsp104重组子测序与分析 | 第59-60页 |
| 3.4.5 PCR扩增目的片段tps2'与hsp104' | 第60-61页 |
| 3.4.6 tps2'与hsp104'连接产物纯化回收 | 第61-62页 |
| 3.4.7 tps2-hsp104重组子PCR筛选验证 | 第62页 |
| 3.4.8 tps2-hsp104重组子测序与分析 | 第62页 |
| 3.5 小结 | 第62-65页 |
| 第四章 重组质粒转化酿酒酵母 | 第65-73页 |
| 4.1 引言 | 第65页 |
| 4.2 实验材料与设备 | 第65-67页 |
| 4.2.1 材料 | 第65页 |
| 4.2.2 培养基制备 | 第65-66页 |
| 4.2.3 主要试剂 | 第66-67页 |
| 4.2.4 主要仪器设备 | 第67页 |
| 4.3 实验方法 | 第67-70页 |
| 4.3.1 酿酒酵母INVSc1转化 | 第67-68页 |
| 4.3.2 重组酿酒酵母质粒的提取 | 第68-69页 |
| 4.3.3 重组酿酒酵母质粒PCR验证 | 第69页 |
| 4.3.4 琼脂糖凝胶电泳验证PCR产物 | 第69-70页 |
| 4.3.5 重组菌株保存 | 第70页 |
| 4.4 实验结果 | 第70-71页 |
| 4.4.1 重组酿酒酵母的质粒提取 | 第70-71页 |
| 4.4.2 重组酿酒酵母的PCR鉴定 | 第71页 |
| 4.5 本章小结 | 第71-73页 |
| 第五章 实验总结与建议 | 第73-75页 |
| 5.1 主要结论 | 第73页 |
| 5.2 建议 | 第73-75页 |
| 参考文献 | 第75-79页 |
| 附录 | 第79-83页 |
| 致谢 | 第83-85页 |
| 研究成果和发表的学术论文 | 第85-87页 |
| 作者和导师简介 | 第87-88页 |
| 附件 | 第88-89页 |
