中华根瘤菌VB12发酵工艺及其phbC基因研究
| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-11页 |
| 第1章 绪论 | 第11-17页 |
| ·中华根瘤菌简介 | 第11-12页 |
| ·根瘤菌特征 | 第11页 |
| ·中华根瘤菌 | 第11-12页 |
| ·中华根瘤菌产生维生素B_(12)的途径 | 第12-15页 |
| ·维生素B_(12)简介 | 第12-13页 |
| ·中华根瘤菌产VB_(12)途径 | 第13-15页 |
| ·中华根瘤菌产生聚羟基丁酸(PHB)颗粒的途径 | 第15-16页 |
| ·PHB颗粒简介 | 第15页 |
| ·中华根瘤菌产生PHB的途径 | 第15-16页 |
| ·PHB颗粒对中华根瘤菌代谢和产VB12的影响 | 第16页 |
| ·根瘤菌产PHB相关基因研究 | 第16页 |
| ·课题研究内容意义 | 第16-17页 |
| 第2章 产VB_(12)中华根瘤菌的鉴定 | 第17-25页 |
| ·引言 | 第17页 |
| ·材料与方法 | 第17-20页 |
| ·材料与仪器 | 第17-18页 |
| ·细菌培养基及培养 | 第18页 |
| ·细菌形态及PHB颗粒观察 | 第18页 |
| ·基因组提取及电泳检测 | 第18-19页 |
| ·PCR克隆 | 第19页 |
| ·DNA纯化 | 第19页 |
| ·DNA测序 | 第19页 |
| ·生长曲线测定方法 | 第19页 |
| ·VB_(12)检测 | 第19-20页 |
| ·结果与分析 | 第20-24页 |
| ·细菌形态及PHB颗粒观察 | 第20页 |
| ·生长曲线 | 第20-21页 |
| ·基因组提取结果 | 第21页 |
| ·16S rDNA PCR结果 | 第21-22页 |
| ·16SrDNA测序比对结果 | 第22-23页 |
| ·VB_(12)测定结果 | 第23-24页 |
| ·本章小结 | 第24-25页 |
| 第3章 中华根瘤菌产VB_(12)初步发酵研究 | 第25-35页 |
| ·引言 | 第25页 |
| ·材料与方法 | 第25-27页 |
| ·材料与仪器 | 第25页 |
| ·培养基配制和菌培养 | 第25-26页 |
| ·生物量测定方法 | 第26页 |
| ·残糖测定方法 | 第26-27页 |
| ·维生素B_(12)测定方法 | 第27页 |
| ·中华根瘤菌常见碳源调查 | 第27页 |
| ·中华根瘤菌维生素B_(12)发酵监测 | 第27页 |
| ·甜菜碱用量调查 | 第27页 |
| ·金属离子调查 | 第27页 |
| ·发酵过程补糖研究 | 第27页 |
| ·结果分析 | 第27-34页 |
| ·麦芽糖检测标准曲线绘制 | 第27-28页 |
| ·VB_(12)检测体系 | 第28-29页 |
| ·中华根瘤菌常见碳源调查 | 第29-30页 |
| ·中华根瘤菌发酵参数监测 | 第30-31页 |
| ·甜菜碱用量对发酵的影响 | 第31页 |
| ·离子对发酵的影响 | 第31-32页 |
| ·中华根瘤菌发酵补糖研究 | 第32-34页 |
| ·本章小结 | 第34-35页 |
| 第4章 phbC基因及其上下游序列克隆 | 第35-47页 |
| ·引言 | 第35-36页 |
| ·材料与方法 | 第36-39页 |
| ·材料和仪器 | 第36页 |
| ·细菌的培养 | 第36页 |
| ·中华根瘤菌基因组DNA提取 | 第36页 |
| ·phbC基因内部序列克隆 | 第36页 |
| ·不均一PCR方法 | 第36-39页 |
| ·结果与分析 | 第39-46页 |
| ·phbC内部序列克隆 | 第39-40页 |
| ·phbC 5'端序列克隆 | 第40-41页 |
| ·phbC 5'端序列克隆结果验证 | 第41-42页 |
| ·phbC 3’端序列克隆 | 第42-43页 |
| ·3'端扩增目的条带结果及鉴定 | 第43-44页 |
| ·phbC基因及其上下游序列 | 第44-46页 |
| ·本章小结 | 第46-47页 |
| 第5章 pPHBCAT整合载体构建 | 第47-57页 |
| ·引言 | 第47页 |
| ·材料与方法 | 第47-50页 |
| ·材料和试剂 | 第47-48页 |
| ·细菌的培养 | 第48页 |
| ·根瘤菌基因组DNA提取 | 第48页 |
| ·氯霉素抗性质粒构建 | 第48页 |
| ·氯霉素抗性质粒转入大肠杆菌 | 第48-49页 |
| ·含phbC基因质粒的构建及鉴定 | 第49-50页 |
| ·质粒提取方法 | 第50页 |
| ·pPHBCAT载体构建 | 第50页 |
| ·pPHBCAT质粒转入大肠杆菌及鉴定 | 第50页 |
| ·结果与分析 | 第50-56页 |
| ·氯霉素抗性质粒构建及鉴定 | 第50-52页 |
| ·含phbC基因质粒的构建及鉴定 | 第52-54页 |
| ·pPHBCAT质粒构建及鉴定 | 第54-56页 |
| ·本章小结 | 第56-57页 |
| 第6章 中华根瘤菌遗传转化系统建立 | 第57-67页 |
| ·引言 | 第57页 |
| ·材料与方法 | 第57-60页 |
| ·材料与仪器 | 第57-58页 |
| ·中华根瘤菌的培养 | 第58页 |
| ·中华根瘤菌抗生素敏感性验证 | 第58页 |
| ·转化DNA片段准备 | 第58-59页 |
| ·中华根瘤菌感受态制备 | 第59页 |
| ·中华根瘤菌电转化 | 第59-60页 |
| ·转化子筛选和鉴定 | 第60页 |
| ·结果与分析 | 第60-65页 |
| ·中华根瘤菌抗生素敏感性验证 | 第60-62页 |
| ·电击转化结果 | 第62页 |
| ·phbC基因敲除转化子鉴定 | 第62-65页 |
| ·本章小结 | 第65-67页 |
| 结论 | 第67-69页 |
| 参考文献 | 第69-73页 |
| 攻读硕士学位期间所发表的论文 | 第73-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
