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纤维素酶辅助酶AA9的毕赤酵母外源表达及其初步应用

摘要第3-4页
Abstract第4-5页
第一章 绪论第8-14页
    1.1 纤维素的酶法降解第8-9页
    1.2 AA9的研究进展第9-12页
        1.2.1 AA9的概述第9-10页
        1.2.2 AA9在木质纤维素酶解中的作用第10-11页
        1.2.3 AA9的外源表达第11-12页
    1.3 毕赤酵母表达系统第12-13页
        1.3.1 毕赤酵母表达系统的特点第12页
        1.3.2 纤维素酶蛋白的毕赤酵母外源表达第12-13页
    1.4 论文的立题依据以及研究内容第13-14页
        1.4.1 立题依据第13页
        1.4.2 主要研究内容第13-14页
第二章 材料与方法第14-19页
    2.1 实验材料第14-15页
        2.1.1 菌株及载体第14页
        2.1.2 实验仪器与试剂第14页
        2.1.3 实验所用培养基第14页
        2.1.4 实验所用溶液第14-15页
    2.2 实验方法第15-18页
        2.2.1 目的基因的优化第15页
        2.2.2 表达载体的构建以及感受态制备第15-16页
        2.2.3 重组毕赤酵母构建第16页
        2.2.4 菌株培养以及摇瓶优化第16-17页
        2.2.5 AA9酶学性质的考察第17页
        2.2.6 AA9在纤维素酶解应用第17-18页
    2.3 测定方法第18-19页
        2.3.1 AA9酶活以及蛋白浓度测定第18页
        2.3.2 原料中组分分析以及酶解率第18-19页
第三章 结果与讨论第19-44页
    3.1 AA9在毕赤酵母中的异源表达第19-27页
        3.1.1 柄孢霉AA9基因优化第19-21页
        3.1.2 含目的基因表达载体构建第21-22页
        3.1.3 含目的基因表达载体电转化以及筛选第22-24页
        3.1.4 AA9酶学性质分析第24-26页
        3.1.5 小结第26-27页
    3.2 高产AA9重组毕赤酵母摇瓶优化及上罐发酵第27-32页
        3.2.1 单质粒重组菌P.pastoris/pPIC9K-gh61摇瓶优化第27-28页
        3.2.2 单质粒重组菌P.pastoris/pPICZαA-gh61摇瓶优化第28-29页
        3.2.3 双质粒整合重组菌摇瓶优化和正交实验第29-31页
        3.2.4 双质粒整合重组菌株上罐发酵第31-32页
        3.2.5 小结第32页
    3.3 AA9应用于纤维质原料酶解的探索第32-44页
        3.3.1 AA9在标准底物酶解中的应用第32-35页
        3.3.2 AA9在甘油有机溶剂预处理木质纤维素酶解中的应用第35-36页
        3.3.3 金属离子对AA9辅助酶解的影响第36-40页
        3.3.4 还原剂对AA9促进酶解作用的影响第40-41页
        3.3.5 AA9替代纤维素酶酶解纤维素第41-43页
        3.3.6 小结第43-44页
主要结论与展望第44-46页
致谢第46-47页
参考文献第47-52页
附录:作者在攻读硕士学位期间发表的论文第52页

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