| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第一章 绪论 | 第9-18页 |
| 1.1 引言 | 第9页 |
| 1.2 L-鸟氨酸的性质及功能 | 第9-10页 |
| 1.2.1 L-鸟氨酸的结构及其性质 | 第9页 |
| 1.2.2 微生物中L-鸟氨酸代谢及代谢调控 | 第9-10页 |
| 1.2.3 L-鸟氨酸功能及应用 | 第10页 |
| 1.3 L-鸟氨酸的合成 | 第10-11页 |
| 1.3.1 化学合成法 | 第10页 |
| 1.3.2 酶催化法 | 第10-11页 |
| 1.3.3 微生物发酵法 | 第11页 |
| 1.4 微生物L-鸟氨酸代谢途径概况 | 第11-15页 |
| 1.4.1 微生物中L-鸟氨酸合成途径 | 第11-12页 |
| 1.4.2 OATase、NAGS及NAOD的功能简介 | 第12-13页 |
| 1.4.3 OATase、NAGS及NAOD的研究进展 | 第13-14页 |
| 1.4.4 L-鸟氨酸的分解代谢研究概述 | 第14-15页 |
| 1.5 代谢工程在鸟氨酸合成中的应用研究进展 | 第15-16页 |
| 1.6 论文研究内容 | 第16-18页 |
| 1.6.1 论文立题依据与研究意义 | 第16页 |
| 1.6.2 论文研究思路与主要内容 | 第16-18页 |
| 第二章 材料与方法 | 第18-29页 |
| 2.1 实验材料 | 第18-22页 |
| 2.1.1 菌种与质粒 | 第18-20页 |
| 2.1.2 引物 | 第20-22页 |
| 2.2 试剂与仪器 | 第22-23页 |
| 2.2.1 主要试剂 | 第22页 |
| 2.2.2 相关试剂的配置 | 第22-23页 |
| 2.2.3 主要仪器 | 第23页 |
| 2.3 微生物培养条件 | 第23-24页 |
| 2.4 实验方法 | 第24-29页 |
| 2.4.1 大肠杆菌质粒抽提 | 第24页 |
| 2.4.2 大肠杆菌感受态的制备 | 第24页 |
| 2.4.3 钝齿棒杆菌电转感受态的制备 | 第24页 |
| 2.4.4 大肠杆菌化学转化法 | 第24页 |
| 2.4.5 CRISPR/pCas9敲除技术 | 第24-25页 |
| 2.4.6 基因组的提取 | 第25-26页 |
| 2.4.7 目的基因的克隆 | 第26页 |
| 2.4.8 构建重组表达质粒 | 第26页 |
| 2.4.9 构建重组菌大肠杆菌与钝齿棒杆菌 | 第26页 |
| 2.4.10 重组菌的表达以及酶活的测定分析 | 第26页 |
| 2.4.11 NAGS与NAOD的纯化分析 | 第26-27页 |
| 2.4.12 NAGS与NAOD的最适反应温度与pH | 第27页 |
| 2.4.13 NAGS与NAOD的热稳定性和pH稳定性 | 第27页 |
| 2.4.14 金属离子以及EDTA对NAGS与NAOD的影响 | 第27页 |
| 2.4.15 对OATase解除鸟氨酸反馈抑制的研究 | 第27页 |
| 2.4.16 NAGS与NAOD的串联表达及酶活测定 | 第27-28页 |
| 2.4.17 大肠杆菌中利用单一质粒串联鸟氨酸合成途径中基因的研究 | 第28页 |
| 2.4.18 氨基酸分析方法 | 第28-29页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第29-51页 |
| 3.1 重组钝齿棒杆菌Cc-QF-1的构建 | 第29-31页 |
| 3.1.1 敲除质粒pK18-argF的构建 | 第29-30页 |
| 3.1.2 重组钝齿棒杆菌Cc-QF-1的构建 | 第30页 |
| 3.1.3 重组钝齿棒杆菌Cc-QF-0与Cc-QF-1产鸟氨酸的初步验证 | 第30-31页 |
| 3.2 解除鸟氨酸对CcOATase反馈抑制的研究 | 第31-34页 |
| 3.2.1 利用饱和突变手段构建解除鸟氨酸对CcOATase的反馈抑制菌株 | 第31-33页 |
| 3.2.2 L-鸟氨酸对CcOATase的反馈抑制分析 | 第33-34页 |
| 3.3 线型L-鸟氨酸合成途径中的NAGS与NAOD的研究 | 第34-41页 |
| 3.3.1 NAGS的克隆与表达 | 第34-35页 |
| 3.3.2 不同来源NAOD的克隆与表达 | 第35-36页 |
| 3.3.3 NAGS与NAOD的纯化及比酶活测定 | 第36-37页 |
| 3.3.4 不同来源NAGS与NAOD的酶学性质比较 | 第37-39页 |
| 3.3.5 定点突变解除L-精氨酸对EcNAGS的反馈抑制 | 第39页 |
| 3.3.6 优化NAGS与NAOD的RBS序列 | 第39-40页 |
| 3.3.7 重组钝齿棒杆菌NAGS与NAOD酶的表达与酶活测定 | 第40-41页 |
| 3.4 重组钝齿棒杆菌产L-鸟氨酸研究 | 第41-44页 |
| 3.4.1 重组钝齿棒杆菌摇瓶发酵产L-鸟氨酸 | 第41-42页 |
| 3.4.2 重组钝齿棒杆菌Cc-QF-1,Cc-QF-2及Cc-QF-4发酵产L-鸟氨酸 | 第42-44页 |
| 3.5 产L-鸟氨酸的重组大肠杆菌构建 | 第44-51页 |
| 3.5.1 speC,speF,argI基因同源片段的扩增 | 第44-45页 |
| 3.5.2 speC,speF,argI敲除质粒的构建 | 第45页 |
| 3.5.3 在E.coli中敲除speC,speF,argI基因的验证 | 第45-46页 |
| 3.5.4 重组大肠杆菌中,利用pET-28a质粒串联表达argA/B/C/D/E基因及相关酶活测定 | 第46-47页 |
| 3.5.5 在重组大肠杆菌中,利用pET-28a质粒串联表达argC/J/B/D基因及相关酶活的测定 | 第47-49页 |
| 3.5.6 重组大肠杆菌EC-O-5/EC-O-6摇瓶发酵产L-鸟氨酸 | 第49-51页 |
| 主要结论和展望 | 第51-53页 |
| 主要结论 | 第51-52页 |
| 展望 | 第52-53页 |
| 致谢 | 第53-55页 |
| 参考文献 | 第55-59页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第59-60页 |
| 附录：酶名称 | 第60页 |
