孔雀石绿单克隆抗体的研制及ELISA检测方法的建立
| 中文摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 目录 | 第7-10页 |
| 符号说明 | 第10-13页 |
| 前言 | 第13-20页 |
| 1 孔雀石绿概述 | 第13-17页 |
| 1.1 孔雀石绿介绍 | 第13-14页 |
| 1.2 孔雀石绿的代谢 | 第14-15页 |
| 1.3 孔雀石绿的毒性 | 第15-17页 |
| 1.3.1 毒性机理 | 第15-16页 |
| 1.3.2 对动物的毒害作用 | 第16页 |
| 1.3.3 对植物的毒害作用 | 第16-17页 |
| 2 孔雀石绿检测方法的研究进展 | 第17-19页 |
| 2.1 色谱法 | 第17-18页 |
| 2.2 免疫学方法 | 第18页 |
| 2.3 其它检测方法 | 第18-19页 |
| 3 本研究的目的及意义 | 第19-20页 |
| 第一部分 孔雀石绿人工抗原的合成及鉴定 | 第20-26页 |
| 1 材料和方法 | 第20-23页 |
| 1.1 试剂 | 第20页 |
| 1.2 仪器与耗材 | 第20页 |
| 1.3 主要溶液系统 | 第20-21页 |
| 1.4 孔雀石绿人工抗原的制备 | 第21-22页 |
| 1.4.1 LMG-BSA的制备 | 第21页 |
| 1.4.2 LMG-OVA的制备 | 第21-22页 |
| 1.5 透析 | 第22页 |
| 1.6 人工抗原的分析与鉴定 | 第22-23页 |
| 1.6.1 人工抗原蛋白浓度的测定 | 第22-23页 |
| 1.6.2 紫外扫描鉴定 | 第23页 |
| 1.6.3 免疫学方法鉴定 | 第23页 |
| 2 结果 | 第23-25页 |
| 2.1 完全抗原的蛋白浓度测定 | 第23页 |
| 2.2 紫外扫描鉴定 | 第23-24页 |
| 2.3 免疫学方法鉴定 | 第24-25页 |
| 3 讨论 | 第25-26页 |
| 第二部分 孔雀石绿单抗的制备 | 第26-34页 |
| 1 材料和方法 | 第26-31页 |
| 1.1 试剂 | 第26页 |
| 1.2 实验动物及生物材料 | 第26页 |
| 1.3 仪器与耗材 | 第26-27页 |
| 1.4 主要溶液系统 | 第27-28页 |
| 1.4.1 细胞培养溶液 | 第27页 |
| 1.4.2 ELISA溶液 | 第27-28页 |
| 1.5 单克隆抗体的制备 | 第28-30页 |
| 1.5.1 动物免疫 | 第28页 |
| 1.5.2 确定包被抗原工作浓度及阳性血清效价 | 第28-29页 |
| 1.5.3 细胞融合 | 第29-30页 |
| 1.6 杂交瘤细胞的筛选及建株 | 第30页 |
| 1.6.1 阳性孔的筛选及亚克隆培养 | 第30页 |
| 1.6.2 稳定性试验及腹水制备 | 第30页 |
| 1.7 单克隆抗体的鉴定 | 第30-31页 |
| 1.7.1 腹水蛋白浓度的测定 | 第30页 |
| 1.7.2 抗体特异性检测 | 第30-31页 |
| 2 结果 | 第31-32页 |
| 2.1 包被原的工作浓度及阳性血清效价 | 第31页 |
| 2.2 单抗细胞株的建立及稳定性 | 第31页 |
| 2.3 腹水的制备 | 第31页 |
| 2.4 单克隆抗体性质的鉴定 | 第31-32页 |
| 2.4.1 腹水蛋白浓度的测定 | 第31页 |
| 2.4.2 抗体的特异性鉴定 | 第31-32页 |
| 3 讨论 | 第32-34页 |
| 3.1 动物免疫 | 第32页 |
| 3.2 杂交瘤细胞培养及筛选 | 第32-33页 |
| 3.3 单抗的制备及鉴定 | 第33-34页 |
| 第三部分 ELISA检测方法的建立及初步应用 | 第34-40页 |
| 1 材料和方法 | 第34-35页 |
| 1.1 仪器与试剂 | 第34页 |
| 1.2 样品 | 第34页 |
| 1.3 ELISA检测方法的建立 | 第34-35页 |
| 1.3.1 抗原抗体最佳工作浓度的确定 | 第34页 |
| 1.3.2 CiELISA标准工作曲线及相关参数 | 第34-35页 |
| 1.4 CIELISA检测方法的应用 | 第35页 |
| 1.4.1 样品的准备 | 第35页 |
| 1.4.2 样品处理 | 第35页 |
| 1.4.3 样品基质的干扰检测 | 第35页 |
| 1.4.4 样品中LMG含量的测定 | 第35页 |
| 2 结果 | 第35-39页 |
| 2.1 ELISA检测方法的建立 | 第35-37页 |
| 2.1.1 抗原抗体工作浓度的确定 | 第35-36页 |
| 2.1.2 CiELISA标准工作曲线及参数 | 第36-37页 |
| 2.2 单抗的初步应用 | 第37-39页 |
| 2.2.1 样品基质干扰 | 第37-38页 |
| 2.2.2 样品中LMG含量测定 | 第38-39页 |
| 3 讨论 | 第39-40页 |
| 全文结论 | 第40-41页 |
| 参考文献 | 第41-46页 |
| 致谢 | 第46-47页 |
