单宁酶产生菌的筛选、发酵优化及酶的纯化研究
| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 前言 | 第12-25页 |
| 1.1 研究背景 | 第12-13页 |
| 1.2 单宁酶的国内外研究进展 | 第13-24页 |
| 1.2.1 单宁酶的来源 | 第13-14页 |
| 1.2.2 产单宁酶微生物的分离筛选 | 第14-17页 |
| 1.2.3 单宁酶活力的测定方法 | 第17-18页 |
| 1.2.4 单宁酶的发酵生产 | 第18-19页 |
| 1.2.5 单宁酶的提取和纯化 | 第19-22页 |
| 1.2.6 单宁酶的酶学性质 | 第22-23页 |
| 1.2.7 单宁酶的应用 | 第23-24页 |
| 1.3 立题意义和主要研究内容 | 第24-25页 |
| 1.3.1 立题意义 | 第24页 |
| 1.3.2 主要研究内容 | 第24-25页 |
| 第二章 单宁酶产生菌的分离筛选及初步鉴定 | 第25-38页 |
| 2.1 引言 | 第25-26页 |
| 2.2 试剂与仪器 | 第26页 |
| 2.2.1 试剂与仪器 | 第26页 |
| 2.2.2 培养基 | 第26页 |
| 2.2.3 溶液配制 | 第26页 |
| 2.3 试验方法 | 第26-29页 |
| 2.3.1 分离材料的采集 | 第26页 |
| 2.3.2 平板初筛 | 第26-27页 |
| 2.3.3 平板点种复筛 | 第27页 |
| 2.3.4 孢子悬液的制备 | 第27页 |
| 2.3.5 固体发酵 | 第27页 |
| 2.3.6 粗酶液的制备 | 第27页 |
| 2.3.7 单宁酶活力的测定 | 第27-28页 |
| 2.3.8 薄层层析检测单宁酸降解产物 | 第28-29页 |
| 2.3.9 分离菌株的初步鉴定 | 第29页 |
| 2.4 结果与分析 | 第29-37页 |
| 2.4.1 单宁酶活力的测定 | 第29-31页 |
| 2.4.2 单宁酶产生菌的分离筛选 | 第31-36页 |
| 2.4.3 菌株CY-3的初步鉴定 | 第36-37页 |
| 2.5 本章小结 | 第37-38页 |
| 第三章 单宁酶固体发酵培养基组分和发酵条件优化 | 第38-53页 |
| 3.1 引言 | 第38-39页 |
| 3.2 材料、试剂与仪器 | 第39页 |
| 3.2.1 材料 | 第39页 |
| 3.2.2 试剂与仪器 | 第39页 |
| 3.3 试验方法 | 第39-41页 |
| 3.3.1 固体发酵及单宁酶的提取 | 第39页 |
| 3.3.2 单宁酶活力测定 | 第39页 |
| 3.3.3 单因素优化 | 第39页 |
| 3.3.4 响应面实验设计 | 第39-40页 |
| 3.3.5 验证试验 | 第40页 |
| 3.3.6 单宁酸的提取 | 第40页 |
| 3.3.7 单宁酸含量测定 | 第40-41页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第41-52页 |
| 3.4.1 单因素优化 | 第41-48页 |
| 3.4.2 响应面优化 | 第48-52页 |
| 3.4.3 验证试验 | 第52页 |
| 3.5 本章小结 | 第52-53页 |
| 第四章 双水相萃取纯化单宁酶 | 第53-66页 |
| 4.1 引言 | 第53-54页 |
| 4.2 试剂与仪器 | 第54页 |
| 4.2.1 试剂与仪器 | 第54页 |
| 4.2.2 培养基 | 第54页 |
| 4.3 试验方法 | 第54-57页 |
| 4.3.1 固体发酵及粗酶的提取 | 第54页 |
| 4.3.2 单宁酶活力的测定 | 第54页 |
| 4.3.3 蛋白质浓度的测定 | 第54-55页 |
| 4.3.4 硫酸铵沉淀 | 第55页 |
| 4.3.5 丙酮沉淀 | 第55页 |
| 4.3.6 双水相萃取 | 第55-57页 |
| 4.3.7 SDS-PAGE检测酶的纯度 | 第57页 |
| 4.4 结果与分析 | 第57-65页 |
| 4.4.1 蛋白质标准曲线 | 第57-58页 |
| 4.4.2 硫酸铵沉淀 | 第58页 |
| 4.4.3 丙酮沉淀 | 第58-59页 |
| 4.4.4 双水相萃取 | 第59-64页 |
| 4.4.5 SDS-PAGE | 第64-65页 |
| 4.5 本章小结 | 第65-66页 |
| 第五章 单宁酶的酶学性质研究 | 第66-74页 |
| 5.1 引言 | 第66页 |
| 5.2 试剂与仪器 | 第66页 |
| 5.3 试验方法 | 第66-68页 |
| 5.3.1 纯化酶液的制备 | 第66页 |
| 5.3.2 单宁酶活力的测定 | 第66页 |
| 5.3.3 酶学性质研究 | 第66-68页 |
| 5.4 结果与讨论 | 第68-73页 |
| 5.4.1 单宁酶的最适反应温度及热稳定性 | 第68-69页 |
| 5.4.2 单宁酶的最适反应pH及酸碱稳定性 | 第69-70页 |
| 5.4.3 金属离子对酶活的影响 | 第70页 |
| 5.4.4 有机溶剂对酶活的影响 | 第70-71页 |
| 5.4.5 表面活性剂及金属螯合剂对酶活的影响 | 第71-72页 |
| 5.4.6 单宁酶的抗氧化性 | 第72-73页 |
| 5.5 本章小结 | 第73-74页 |
| 第六章 结论与展望 | 第74-76页 |
| 6.1 结论 | 第74-75页 |
| 6.2 本研究的创新点 | 第75页 |
| 6.3 展望 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-88页 |
| 附录 | 第88-92页 |
| 致谢 | 第92-93页 |
| 攻读学位期间发表的论文 | 第93页 |
