| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-21页 |
| 1.1 反式-4-羟脯氨酸概述 | 第10页 |
| 1.2 反式-4-羟脯氨酸的生产及应用 | 第10-12页 |
| 1.2.1 反式-4-羟脯氨酸的生产 | 第10-11页 |
| 1.2.2 反式-4-脯氨酸羟化酶 | 第11-12页 |
| 1.2.3 反式-4-羟脯氨酸的应用 | 第12页 |
| 1.3 重组大肠杆菌外源基因的高效表达 | 第12-15页 |
| 1.3.1 表达载体和质粒稳定性 | 第13-14页 |
| 1.3.2 启动子的选择 | 第14页 |
| 1.3.3 密码子 | 第14-15页 |
| 1.4 重组大肠杆菌高密度发酵工艺 | 第15-18页 |
| 1.4.1 碳氮比 | 第15-16页 |
| 1.4.2 金属离子和无机盐 | 第16页 |
| 1.4.3 pH值 | 第16-17页 |
| 1.4.4 温度 | 第17页 |
| 1.4.5 DO值 | 第17-18页 |
| 1.5 国内外研究现状 | 第18-19页 |
| 1.6 本研究的意义和内容 | 第19-21页 |
| 1.6.1 研究意义 | 第19页 |
| 1.6.2 研究内容 | 第19-21页 |
| 第二章 材料与方法 | 第21-35页 |
| 2.1 材料 | 第21-24页 |
| 2.1.1 菌株 | 第21页 |
| 2.1.2 质粒 | 第21页 |
| 2.1.3 试剂 | 第21-22页 |
| 2.1.4 主要试剂的配制 | 第22-23页 |
| 2.1.5 培养基 | 第23-24页 |
| 2.1.6 仪器设备 | 第24页 |
| 2.2 方法 | 第24-35页 |
| 2.2.1 反式-脯氨酸-4-羟化酶基因序列优化 | 第24-25页 |
| 2.2.2 琼脂糖凝胶电泳 | 第25页 |
| 2.2.3 琼脂糖凝胶DNA回收 | 第25-26页 |
| 2.2.4 大肠杆菌感受态细胞制备及转化 | 第26-27页 |
| 2.2.5 大肠杆菌重组质粒DNA抽提 | 第27页 |
| 2.2.6 重组质粒的酶切验证 | 第27-28页 |
| 2.2.7 酶切产物与其他载体链接 | 第28页 |
| 2.2.8 重组质粒中插入片段的序列测定及分析比对 | 第28页 |
| 2.2.9 基因片段与载体pCDFDuet-1、pACYCDuet-1、pETDuet-1、pRSFDuet-1、pCOLAduet-1的连接 | 第28-29页 |
| 2.2.10 阳性转化子的挑取及验证 | 第29页 |
| 2.2.11 蛋白质电泳 | 第29-30页 |
| 2.2.12 L-脯氨酸羟化酶酶活测定 | 第30-32页 |
| 2.2.13 不同宿主细胞对反式-4-脯氨酸羟化酶比酶活的影响 | 第32页 |
| 2.2.14 质粒载体对反式-4-脯氨酸羟化酶比酶活的影响 | 第32-33页 |
| 2.2.15 重组大肠杆菌DH5α/pUC19-pH生长及发酵曲线的绘制 | 第33页 |
| 2.2.16 重组菌DH5α/pUC19-pH摇瓶发酵单因素优化实验 | 第33-35页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第35-58页 |
| 3.1 单启动子PH基因工程菌的构建 | 第35-43页 |
| 3.1.1 反式-4-脯氨酸羟化酶基因序列优化 | 第35-38页 |
| 3.1.2 反式-4-脯氨酸羟化酶非编码区基因优化 | 第38-41页 |
| 3.1.3 反式-4-脯氨酸羟化酶基因质粒构建 | 第41-43页 |
| 3.2 反式-4-羟基脯氨酸重组大肠杆菌的优化 | 第43-46页 |
| 3.2.1 宿主菌优化 | 第43-44页 |
| 3.2.2 质粒载体优化 | 第44-46页 |
| 3.3 重组大肠杆菌DH5α/pUC19-pH摇瓶发酵工艺优化 | 第46-57页 |
| 3.3.1 重组大肠杆菌DH5α/pUC19-pH生长曲线测定 | 第46-47页 |
| 3.3.2 DH5α/pUC19-pH摇瓶发酵曲线测定 | 第47-48页 |
| 3.3.3 培养基优化 | 第48-49页 |
| 3.3.4 温度优化 | 第49-50页 |
| 3.3.5 初始L-脯氨酸底物浓度优化 | 第50-51页 |
| 3.3.6 初始Fe~(2+)浓度优化 | 第51-53页 |
| 3.3.7 初始Mg~(2+)浓度优化 | 第53-54页 |
| 3.3.8 胰蛋白胨添加量的优化 | 第54-55页 |
| 3.3.9 碳氮比优化 | 第55-57页 |
| 3.4 单因素优化结论验证 | 第57-58页 |
| 结论与展望 | 第58-61页 |
| 结论 | 第58-59页 |
| 展望 | 第59-61页 |
| 参考文献 | 第61-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 作者简介 | 第68页 |
