| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 主要缩略词中英文对照 | 第15-16页 |
| 第一章 绪论 | 第16-41页 |
| 1.1 蓝莓概述 | 第16-22页 |
| 1.1.1 蓝莓化学成分 | 第16-19页 |
| 1.1.2 蓝莓生物活性研究概述 | 第19-22页 |
| 1.2 衰老理论 | 第22-38页 |
| 1.2.1 衰老理论学说 | 第23-26页 |
| 1.2.2 衰老调控的研究模型 | 第26-27页 |
| 1.2.3 秀丽隐杆线虫抗衰老研究进展 | 第27-34页 |
| 1.2.4 秀丽隐杆线虫RNAi干扰技术 | 第34-38页 |
| 1.3 论文研究目的及意义 | 第38页 |
| 1.4 论文研究内容 | 第38-40页 |
| 1.5 论文研究路线 | 第40-41页 |
| 第二章 细胞水平研究蓝莓提取物抗氧化活性 | 第41-78页 |
| 2.1 前言 | 第41-43页 |
| 2.2 材料和设备 | 第43-46页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第43-44页 |
| 2.2.2 试剂和设备 | 第44-46页 |
| 2.3 实验方法 | 第46-53页 |
| 2.3.1 试剂配制方法 | 第46-47页 |
| 2.3.2 蓝莓提取物制备 | 第47-48页 |
| 2.3.3 蓝莓总酚、总黄酮含量测定 | 第48-49页 |
| 2.3.4 HPLC鉴定蓝莓中植物化学成分 | 第49-50页 |
| 2.3.5 蓝莓提取物抗氧化活性的测定 | 第50-53页 |
| 2.3.6 蓝莓提取物体外肿瘤抗增殖活性 | 第53页 |
| 2.3.7 数据统计与分析 | 第53页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第53-77页 |
| 2.4.1 蓝莓中总多酚和总黄酮含量 | 第53-55页 |
| 2.4.2 蓝莓提取物化学成分分析 | 第55-64页 |
| 2.4.3 蓝莓提取物抗氧化活性研究 | 第64-68页 |
| 2.4.4 蓝莓提取物抗人肝癌HepG2细胞增殖能力 | 第68-69页 |
| 2.4.5 多元统计分析抗氧化活性与植物化学成分关系 | 第69-77页 |
| 2.5 本章小结 | 第77-78页 |
| 第三章 RAW264.7巨噬细胞炎症模型研究蓝莓提取物抗炎活性 | 第78-104页 |
| 3.1 前言 | 第78-79页 |
| 3.2 材料和设备 | 第79-81页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第79-80页 |
| 3.2.2 主要试剂和设备 | 第80页 |
| 3.2.3 实验所用抗体 | 第80-81页 |
| 3.3 实验方法 | 第81-88页 |
| 3.3.1 试剂配制方法 | 第81-82页 |
| 3.3.2 蓝莓提取物对RAW264.7巨噬细胞毒性检测 | 第82-83页 |
| 3.3.3 蓝莓提取物对炎性因子表达的影响 | 第83-86页 |
| 3.3.4 蓝莓提取物对ROS表达的影响 | 第86页 |
| 3.3.5 Westernblot检测蓝莓提取物体对NLRP3炎症小体的影响 | 第86-88页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第88-103页 |
| 3.4.1 蓝莓提取物对RAW264.7巨噬细胞毒性检测 | 第88-89页 |
| 3.4.2 蓝莓提取物对炎性因子表达的影响 | 第89-96页 |
| 3.4.3 蓝莓提取物对ROS表达的影响 | 第96-97页 |
| 3.4.4 蓝莓提取物对炎症小体表达的影响 | 第97-101页 |
| 3.4.5 Westernblot检测蓝莓提取物对NLRP3炎症小体的影响 | 第101-103页 |
| 3.5 本章小结 | 第103-104页 |
| 第四章 Transwell共培养体系研究蓝莓提取物抗紫外辐射损伤活性 | 第104-122页 |
| 4.1 前言 | 第104-105页 |
| 4.2 材料和设备 | 第105页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第105页 |
| 4.2.2 主要试剂和设备 | 第105页 |
| 4.2.3 实验所用抗体 | 第105页 |
| 4.3 实验方法 | 第105-108页 |
| 4.3.1 试剂配制方法 | 第105-106页 |
| 4.3.2 蓝莓提取物对HaCaT细胞毒性检测 | 第106页 |
| 4.3.3 蓝莓提取物对紫外辐照损伤HaCaT和HFF细胞保护作用 | 第106页 |
| 4.3.4 蓝莓提取物对紫外辐照损伤后HaCaT和HFF细胞MMP-1的影响 | 第106-107页 |
| 4.3.5 蓝莓提取物对HaCaT和HFF细胞的抗氧化酶的影响 | 第107页 |
| 4.3.6 蓝莓提取物对炎性因子表达的影响 | 第107页 |
| 4.3.7 Westernblot检测蓝莓提取物体对MAPK信号通路的影响 | 第107-108页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第108-120页 |
| 4.4.1 蓝莓提取物对HaCaT和HFF的细胞毒性 | 第108页 |
| 4.4.2 蓝莓提取物对紫外辐照损伤后HaCaT和HFF细胞的保护作用 | 第108-109页 |
| 4.4.3 蓝莓提取物对紫外辐照损伤后HaCaT和HFF细胞MMP-1的影响 | 第109-110页 |
| 4.4.4 蓝莓提取物对HaCaT和HFF细胞的抗氧化酶的影响 | 第110-112页 |
| 4.4.5 蓝莓提取物对HaCaT和HFF细胞炎症性细胞因子的影响 | 第112-115页 |
| 4.4.6 蓝莓提取物对HaCaT和HFF细胞MAPK信号通路的影响 | 第115-118页 |
| 4.4.7 Westernblot检测蓝莓提取物对HaCaT和HFF细胞MAPK信号通路作用机制 | 第118-120页 |
| 4.5 本章小结 | 第120-122页 |
| 第五章 秀丽隐杆线虫衰老模型研究蓝莓提取物抗衰老活性 | 第122-141页 |
| 5.1 前言 | 第122-123页 |
| 5.2 材料和设备 | 第123-124页 |
| 5.2.1 实验材料 | 第123页 |
| 5.2.2 主要试剂和设备 | 第123-124页 |
| 5.3 实验方法 | 第124-130页 |
| 5.3.1 试剂配制方法 | 第124-125页 |
| 5.3.2 大肠杆菌(E.coilOP50)活化和涂平板 | 第125-126页 |
| 5.3.3 线虫的培养、传代及计数 | 第126页 |
| 5.3.4 线虫同期化处理 | 第126-127页 |
| 5.3.5 蓝莓提取物对线虫寿命的影响 | 第127-128页 |
| 5.3.6 蓝莓提取物对线虫急性损伤的影响 | 第128页 |
| 5.3.7 蓝莓提取物对线虫体内ROS含量影响 | 第128-129页 |
| 5.3.8 蓝莓提取物对线虫体内抗氧化酶含量影响 | 第129页 |
| 5.3.9 蓝莓提取物对线虫体内相关抗氧化基因mRNA表达水平影响 | 第129-130页 |
| 5.4 结果与讨论 | 第130-140页 |
| 5.4.1 蓝莓提取物延长线虫的寿命 | 第130-131页 |
| 5.4.2 蓝莓提取物降低线虫的繁殖力 | 第131-132页 |
| 5.4.3 蓝莓提取物对线虫脂褐素和身体长度影响 | 第132-133页 |
| 5.4.4 蓝莓提取物对线虫行动力的影响 | 第133-134页 |
| 5.4.5 蓝莓提取物对紫外辐照损伤的保护作用 | 第134-135页 |
| 5.4.6 蓝莓提取物对百草枯氧化损伤的保护作用 | 第135-136页 |
| 5.4.7 蓝莓提取物对热应激损伤的保护作用 | 第136-137页 |
| 5.4.8 蓝莓提取物对线虫体内ROS含量的影响 | 第137-138页 |
| 5.4.9 蓝莓提取物对线虫体内抗氧化酶含量的影响 | 第138-139页 |
| 5.4.10 蓝莓提取物对体内相关抗氧化基因mRNA的影响 | 第139-140页 |
| 5.5 本章小结 | 第140-141页 |
| 第六章 秀丽隐杆线虫衰老模型研究蓝莓提取物抗衰老机制 | 第141-157页 |
| 6.1 前言 | 第141-142页 |
| 6.2 材料和设备 | 第142-143页 |
| 6.2.1 实验材料 | 第142页 |
| 6.2.2 主要试剂和设备 | 第142-143页 |
| 6.3 实验方法 | 第143-150页 |
| 6.3.1 线虫总RNA提取 | 第143页 |
| 6.3.2 daf-16基因的反转录以及扩增 | 第143-145页 |
| 6.3.3 pGM-T克隆载体的构建和测定 | 第145-146页 |
| 6.3.4 E.coliDH5α感受态制备和转化以及表达载体构建 | 第146-147页 |
| 6.3.5 pEGM-T-Daf-16表达载体的双酶切与纯化 | 第147-148页 |
| 6.3.6 Daf-16基因与L4440表达载体连接 | 第148页 |
| 6.3.7 E.coilHT115(DE3)感受态制备 | 第148页 |
| 6.3.8 E.coilHT115(DE3)感受态与L4440-Daf-16表达载体的转化 | 第148页 |
| 6.3.9 E.coilHT115(DE3)感受态与L4440-Daf-16表达载体的鉴定 | 第148-149页 |
| 6.3.10 daf-16基因dsRNA表达以及干扰效果测定 | 第149页 |
| 6.3.11 利用daf-16：：GFP突变体线虫(GR1532)检测RNAi(daf-16)在蛋白水平上的效果 | 第149-150页 |
| 6.3.12 蓝莓提取物对RNAi(daf-16)N2株线虫对寿命测定 | 第150页 |
| 6.3.13 RNAi(daf-16)干扰线虫下游基因检测 | 第150页 |
| 6.4 结果与讨论 | 第150-156页 |
| 6.4.1 目的基因的扩增以及克隆载体HT115-L4440-daf-16构建 | 第150-152页 |
| 6.4.2 daf-16基因干扰效果 | 第152页 |
| 6.4.3 利用daf-16：：GFP突变体线虫(GR1532)检测RNAi(daf-16)在蛋白水平上的效果 | 第152-153页 |
| 6.4.4 蓝莓提取物对RNAi(daf-16)N2株线虫寿命的影响 | 第153-154页 |
| 6.4.5 蓝莓提取物对N2株线虫daf-16下游基因的影响 | 第154-156页 |
| 6.5 本章小结 | 第156-157页 |
| 结论与展望 | 第157-160页 |
| 1、结论 | 第157-158页 |
| 2、论文创新点 | 第158页 |
| 3、展望 | 第158-160页 |
| 参考文献 | 第160-185页 |
| 攻读博士学位期间取得的研究成果 | 第185-187页 |
| 致谢 | 第187-188页 |
| 附件 | 第188页 |
