| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第一章 绪论 | 第8-20页 |
| 1.1 酪胺及其衍生物手性氨基醇的简述 | 第8-12页 |
| 1.1.1 酪胺的简介及应用 | 第8-9页 |
| 1.1.2 酪胺的合成 | 第9页 |
| 1.1.3 手性氨基醇的简介及应用 | 第9-10页 |
| 1.1.4 手性氨基醇的合成 | 第10-12页 |
| 1.2 酪氨酸脱羧酶的概述 | 第12-15页 |
| 1.2.1 酪氨酸脱羧酶的简介 | 第12页 |
| 1.2.2 酪氨酸脱羧酶的晶体结构 | 第12-14页 |
| 1.2.3 酪氨酸脱羧酶的应用 | 第14-15页 |
| 1.3 酪氨酸脱羧酶的异源表达 | 第15-17页 |
| 1.3.1 不同来源的酪氨酸脱羧酶在大肠杆菌中的异源表达 | 第15-16页 |
| 1.3.2 重组蛋白在大肠杆菌中表达形成包涵体的原因及促进可溶性表达策略 | 第16-17页 |
| 1.4 本课题研究意义及主要研究内容 | 第17-20页 |
| 1.4.1 课题来源 | 第17-18页 |
| 1.4.2 本课题研究背景与研究意义 | 第18页 |
| 1.4.3 本课题主要研究内容及研究路线 | 第18-20页 |
| 第二章 材料与方法 | 第20-30页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-22页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第20页 |
| 2.1.2 主要实验试剂及来源 | 第20-21页 |
| 2.1.3 培养基及主要溶液的配制 | 第21页 |
| 2.1.4 实验所用引物 | 第21页 |
| 2.1.5 主要实验仪器及厂家 | 第21-22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-30页 |
| 2.2.1 基础分子实验技能 | 第22-23页 |
| 2.2.2 E.coliBL21(DE3)/pET24a-tdc重组菌的表达和纯化 | 第23-24页 |
| 2.2.3 重组质粒的构建和表达 | 第24-26页 |
| 2.2.4 RT-PCR分析目标分子伴侣基因的表达水平 | 第26-27页 |
| 2.2.5 利用酪氨酸脱羧酶合成酪胺 | 第27-28页 |
| 2.2.6 丙氨酸扫描突变库的构建 | 第28页 |
| 2.2.7 酶活力测定、蛋白浓度测定及还原糖含量测定 | 第28-29页 |
| 2.2.8 化学法合成对羟基苯丝氨酸钠盐 | 第29-30页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第30-48页 |
| 3.1 重组TyrDC可溶性表达及其包涵体形成原因 | 第30-39页 |
| 3.1.1 诱导剂IPTG和葡萄糖对TyrDC可溶性表达的影响 | 第30-31页 |
| 3.1.2 pH对TyrDC可溶性表达的影响 | 第31-33页 |
| 3.1.3 代谢物对TyrDC可溶性表达的影响 | 第33-34页 |
| 3.1.4 不同碳水化合物对TyrDC可溶性表达的影响 | 第34-37页 |
| 3.1.5 不同分子伴侣对重组TyrDC可溶性表达的影响 | 第37页 |
| 3.1.6 重组TyrDC可溶性表达条件的优化 | 第37-39页 |
| 3.2 酪氨酸脱羧酶催化合成酪胺 | 第39-41页 |
| 3.2.1 不同缓冲体系pH和温度对酪胺合成反应的影响 | 第39页 |
| 3.2.2 不同表面活性剂及两相体系对酪胺合成反应的影响 | 第39-41页 |
| 3.2.3 高浓度下的酪胺合成反应 | 第41页 |
| 3.3 对L-酪氨酸脱羧酶的分子改造 | 第41-45页 |
| 3.3.1 丙氨酸扫描突变库的构建及初筛 | 第42-43页 |
| 3.3.2 组合突变库的构建及复筛 | 第43-44页 |
| 3.3.3 S101A和M99A/S586A的纯化和纯酶活力测定 | 第44-45页 |
| 3.4 化学法合成对羟基苯丝氨酸钠盐的探索 | 第45-48页 |
| 主要结论与展望 | 第48-50页 |
| 主要结论 | 第48-49页 |
| 展望 | 第49-50页 |
| 致谢 | 第50-52页 |
| 参考文献 | 第52-57页 |
| 附录 | 第57-61页 |
| 附录1：本论文所使用引物 | 第57-60页 |
| 附录2：标准曲线 | 第60-61页 |
| 附录3：作者在攻读硕士期间发表的论文 | 第61页 |
