| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 绪论 | 第10-22页 |
| 1.1 1,3-1,4-β-葡聚糖酶概述 | 第10-12页 |
| 1.1.1 β-葡聚糖酶的蛋白质三维结构和催化机制 | 第10-11页 |
| 1.1.2 β-葡聚糖酶的应用 | 第11-12页 |
| 1.2 β-葡聚糖酶热稳定性研究进展 | 第12-15页 |
| 1.2.1 产高热稳定 β-葡聚糖酶菌株的筛选 | 第13页 |
| 1.2.2 定点突变及定向进化 | 第13页 |
| 1.2.3 N/C端改造 | 第13-14页 |
| 1.2.4 多功能酶的构建 | 第14页 |
| 1.2.5 分子动力学模拟研究 | 第14-15页 |
| 1.3 酶热稳定性改造研究进展 | 第15-20页 |
| 1.3.1 酶热稳定性概述 | 第15页 |
| 1.3.2 提高酶热稳定性方法概述 | 第15-20页 |
| 1.4 本论文的立题依据和主要研究内容 | 第20-22页 |
| 1.4.1 立题依据与研究意义 | 第20-21页 |
| 1.4.2 主要研究内容 | 第21-22页 |
| 第二章 赖氨酸在 1,3-1,4-β-葡聚糖酶热稳定性中作用分析 | 第22-42页 |
| 2.1 前言 | 第22-23页 |
| 2.2 材料与方法 | 第23-29页 |
| 2.2.1 菌株、质粒及相关引物 | 第23页 |
| 2.2.2 主要设备、试剂和相关培养基 | 第23-25页 |
| 2.2.3 分子克隆操作方法 | 第25-26页 |
| 2.2.4 主要实验方法 | 第26-27页 |
| 2.2.5 β-葡聚糖酶的序列及结构分析 | 第27-28页 |
| 2.2.6 分子动力学模拟分析 | 第28-29页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第29-41页 |
| 2.3.1 β-葡聚糖酶基因序列分析 | 第29页 |
| 2.3.2 β-葡聚糖酶三维结构同源建模及结构分析 | 第29-31页 |
| 2.3.3 β-葡聚糖酶的化学修饰分析 | 第31-32页 |
| 2.3.4 野生酶与修饰酶的酶学性质测定 | 第32页 |
| 2.3.5 特基拉芽孢杆菌与淀粉液化芽孢杆菌来源 β-葡聚糖酶氨基酸序列及三维结构比较 | 第32-33页 |
| 2.3.6 赖氨酸突变对酶热稳定性影响预测 | 第33-34页 |
| 2.3.7 野生酶与突变酶的酶学性质 | 第34-36页 |
| 2.3.8 野生酶与三突变酶的结构柔性分析 | 第36-38页 |
| 2.3.9 野生酶与突变酶的结构分析 | 第38-40页 |
| 2.3.10 赖氨酸在 β-葡聚糖酶热稳定性中作用解析 | 第40-41页 |
| 2.4 本章小结 | 第41-42页 |
| 第三章 1,3-1,4-β-葡聚糖酶的二硫键改造研究 | 第42-57页 |
| 3.1 前言 | 第42页 |
| 3.2 材料与方法 | 第42-45页 |
| 3.2.1 菌株、质粒及引物 | 第42-43页 |
| 3.2.2 主要试剂、相关培养基及分析软件 | 第43-44页 |
| 3.2.3 β-葡聚糖酶二硫键引入的理性设计 | 第44页 |
| 3.2.4 β-葡聚糖酶突变酶基因片段的扩增及质粒构建 | 第44页 |
| 3.2.5 重组 β-葡聚糖酶的分析检测及酶学性质测定 | 第44页 |
| 3.2.6 游离半胱氨酸测定方法 | 第44-45页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第45-56页 |
| 3.3.1 二硫键突变位点的筛选 | 第45-48页 |
| 3.3.2 野生酶和突变酶的表达及纯化 | 第48页 |
| 3.3.3 游离半胱氨酸的测定 | 第48-49页 |
| 3.3.4 野生酶和突变酶的酶学性质 | 第49-52页 |
| 3.3.5 野生酶和突变酶的蛋白质结构柔性分析 | 第52-53页 |
| 3.3.6 野生酶和突变酶的结构分析 | 第53-55页 |
| 3.3.7 三步筛选法有效性分析 | 第55页 |
| 3.3.8 二硫键引入改变 β-葡聚糖酶热稳定性和pH性质机理解析 | 第55-56页 |
| 3.4 本章小结 | 第56-57页 |
| 第四章 β-葡聚糖酶突变热点区域分析及改造研究 | 第57-74页 |
| 4.1 前言 | 第57-58页 |
| 4.2 材料与方法 | 第58-60页 |
| 4.2.1 菌株、质粒及相关引物 | 第58页 |
| 4.2.2 主要试剂、相关培养基及培养条件 | 第58页 |
| 4.2.3 β-葡聚糖酶氨基酸序列比对及分子动力学模拟 | 第58-59页 |
| 4.2.4 β-葡聚糖酶的分子克隆操作方法 | 第59-60页 |
| 4.2.5 重组 β-葡聚糖酶的分析检测及酶学性质测定 | 第60页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第60-72页 |
| 4.3.1 β-葡聚糖酶氨基酸序列比对分析 | 第60-62页 |
| 4.3.2 β-葡聚糖酶的分子动力学模拟分析 | 第62-63页 |
| 4.3.3 β-葡聚糖酶的定点突变 | 第63-64页 |
| 4.3.4 β-葡聚糖酶的迭代饱和突变研究 | 第64-65页 |
| 4.3.5 野生酶和突变酶VII的酶学性质 | 第65-67页 |
| 4.3.6 野生酶和突变酶VII的柔性分析 | 第67-68页 |
| 4.3.7 野生酶和突变酶的结构分析 | 第68-70页 |
| 4.3.8 关键氨基酸区域/氨基酸位点筛选方法分析 | 第70-71页 |
| 4.3.9 β-葡聚糖酶酶学性质提高机理解析 | 第71-72页 |
| 4.4 本章小结 | 第72-74页 |
| 第五章 高热稳定 β-葡聚糖酶的构建、表达及在糖化过程中的应用研究 | 第74-89页 |
| 5.1 前言 | 第74-75页 |
| 5.2 材料与方法 | 第75-78页 |
| 5.2.1 菌株、质粒及相关引物 | 第75页 |
| 5.2.2 主要试剂、相关培养基及培养条件 | 第75页 |
| 5.2.3 重组菌构建方法 | 第75-76页 |
| 5.2.4 菌株生长曲线及酶活曲线的测定 | 第76-77页 |
| 5.2.5 重组 β-葡聚糖酶的表达与纯化 | 第77页 |
| 5.2.6 重组 β-葡聚糖酶的分析检测及酶学性质测定方法 | 第77页 |
| 5.2.7 重组枯草芽孢杆菌发酵条件优化 | 第77-78页 |
| 5.2.8 重组 β-葡聚糖酶在麦汁协定糖化的应用 | 第78页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第78-87页 |
| 5.3.1 重组菌生长曲线和酶活曲线 | 第78-79页 |
| 5.3.2 重组菌质粒分离稳定性分析 | 第79-80页 |
| 5.3.3 组合突变酶的表达与纯化 | 第80页 |
| 5.3.4 组合突变酶的酶学性质 | 第80-84页 |
| 5.3.5 分子动力学模拟分析 | 第84页 |
| 5.3.6 野生酶和突变酶的结构分析 | 第84-86页 |
| 5.3.7 枯草芽孢杆菌发酵条件优化 | 第86-87页 |
| 5.3.8 组合突变酶在麦汁协定糖化中的应用 | 第87页 |
| 5.4 本章小结 | 第87-89页 |
| 主要结论与展望 | 第89-91页 |
| 主要结论 | 第89-90页 |
| 展望 | 第90-91页 |
| 论文主要创新点 | 第91-92页 |
| 致谢 | 第92-94页 |
| 参考文献 | 第94-107页 |
| 附录: 作者在攻读博士学位期间发表的论文 | 第107页 |
