| 摘要 | 第2-3页 |
| Abstract | 第3-4页 |
| 引言 | 第8-9页 |
| 1 文献综述 | 第9-25页 |
| 1.1 褐藻简介 | 第9-11页 |
| 1.1.1 褐藻的特性 | 第9-10页 |
| 1.1.2 褐藻的主要组成成分 | 第10-11页 |
| 1.2 褐藻胶 | 第11-14页 |
| 1.2.1 褐藻胶的结构和性质 | 第11-13页 |
| 1.2.2 褐藻胶的降解方法 | 第13-14页 |
| 1.3 褐藻胶寡糖的应用与前景 | 第14-16页 |
| 1.4 褐藻胶裂解酶 | 第16-22页 |
| 1.4.1 褐藻胶裂解酶的来源与分类 | 第16-17页 |
| 1.4.2 褐藻胶裂解酶的结构 | 第17-18页 |
| 1.4.3 褐藻胶裂解酶底物特异性及与结构的关系 | 第18-20页 |
| 1.4.4 褐藻胶裂解酶活性检测方法 | 第20-21页 |
| 1.4.5 褐藻胶裂解酶的功能与应用前景 | 第21-22页 |
| 1.5 褐藻产生物乙醇的研究现状 | 第22-24页 |
| 1.6 本课题的研究内容及研究意义 | 第24-25页 |
| 2 褐藻胶降解菌的筛选、鉴定及产酶条件优化 | 第25-38页 |
| 2.1 引言 | 第25页 |
| 2.2 材料 | 第25-27页 |
| 2.2.1 主要实验仪器 | 第25-26页 |
| 2.2.2 主要实验试剂 | 第26页 |
| 2.2.3 培养基 | 第26-27页 |
| 2.3 实验方法 | 第27-29页 |
| 2.3.1 菌种来源 | 第27页 |
| 2.3.2 褐藻胶降解菌的筛选 | 第27页 |
| 2.3.3 菌种保藏 | 第27页 |
| 2.3.4 菌株鉴定与分析 | 第27-28页 |
| 2.3.5 产酶条件优化 | 第28-29页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第29-37页 |
| 2.4.1 褐藻胶降解菌的筛选与鉴定 | 第29-30页 |
| 2.4.2 种子培养基菌株BH17的生长曲线 | 第30-31页 |
| 2.4.3 培养基成分优化 | 第31-35页 |
| 2.4.4 发酵条件的优化 | 第35-37页 |
| 2.5 小结 | 第37-38页 |
| 3 褐藻胶裂解酶基因的克隆表达 | 第38-51页 |
| 3.1 引言 | 第38页 |
| 3.2 材料 | 第38-40页 |
| 3.2.1 菌株和质粒 | 第38页 |
| 3.2.2 培养基 | 第38页 |
| 3.2.4 试剂 | 第38-39页 |
| 3.2.5 主要实验仪器 | 第39-40页 |
| 3.3 实验方法 | 第40-45页 |
| 3.3.1 引物设计及序列比对 | 第40-41页 |
| 3.3.2 质粒提取与E.coliDH5α感受态的制备 | 第41页 |
| 3.3.3 PCR法扩增褐藻胶降解关键酶基因 | 第41-42页 |
| 3.3.4 重组载体的构建及转化 | 第42-43页 |
| 3.3.5 重组酶的表达及检测 | 第43-44页 |
| 3.3.6 重组酶的酶活测定方法 | 第44页 |
| 3.3.7 诱导条件的优化 | 第44-45页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第45-50页 |
| 3.4.1 褐藻胶裂解酶基因的克隆及表达载体的构建 | 第45-46页 |
| 3.4.2 五株重组菌褐藻胶裂解酶的表达 | 第46-47页 |
| 3.4.3 五株重组菌褐藻胶裂解酶的酶活测定 | 第47-48页 |
| 3.4.4 rAlgV3诱导条件的优化 | 第48-49页 |
| 3.4.5 BL21-AlgV3的高密度培养及诱导表达 | 第49-50页 |
| 3.5 小结 | 第50-51页 |
| 4 褐藻胶裂解酶的分离纯化与酶学性质 | 第51-66页 |
| 4.1 引言 | 第51页 |
| 4.2 实验材料 | 第51-53页 |
| 4.2.1 主要试验仪器 | 第51-52页 |
| 4.2.2 主要化学试剂 | 第52页 |
| 4.2.3 培养基 | 第52-53页 |
| 4.3 实验方法 | 第53-57页 |
| 4.3.1 重力柱纯化重组酶 | 第53-54页 |
| 4.3.2 重组酶rAlgV3酶活测定 | 第54页 |
| 4.3.3 WesternBloting验证 | 第54页 |
| 4.3.4 BCA法测定蛋白含量 | 第54-55页 |
| 4.3.5 重组酶rAlgV3的酶学性质 | 第55-56页 |
| 4.3.6 褐藻胶裂解酶降解产物ESI-MS分析 | 第56-57页 |
| 4.4 结果与分析 | 第57-64页 |
| 4.4.1 重组蛋白酶的分离纯化 | 第57-58页 |
| 4.4.2 重组酶rAlgV3的最适温度和热稳定性 | 第58-59页 |
| 4.4.3 重组酶rAlgV3的最适pH和pH稳定性 | 第59-61页 |
| 4.4.4 不同离子对重组酶rAlgV3酶活的影响 | 第61-62页 |
| 4.4.5 不同NaCl浓度对重组酶rAlgV3活性的影响 | 第62页 |
| 4.4.6 重组酶rAlgV3底物偏好性分析 | 第62-64页 |
| 4.4.7 褐藻胶裂解酶降解产物ESI-MS分析 | 第64页 |
| 4.5 小结 | 第64-66页 |
| 结论 | 第66-67页 |
| 展望 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-76页 |
| 附录A BH17基因序列 | 第76-77页 |
| 附录B VMC35240基因及蛋白序列 | 第77-79页 |
| 附录C rAlgV3基因及蛋白序列 | 第79-81页 |
| 附录D 常用缓冲溶液的配制方法 | 第81-83页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第83-84页 |
| 致谢 | 第84-86页 |
