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褐藻胶裂解酶产生菌的筛选及其基因的克隆表达

摘要第2-3页
Abstract第3-4页
引言第8-9页
1 文献综述第9-25页
    1.1 褐藻简介第9-11页
        1.1.1 褐藻的特性第9-10页
        1.1.2 褐藻的主要组成成分第10-11页
    1.2 褐藻胶第11-14页
        1.2.1 褐藻胶的结构和性质第11-13页
        1.2.2 褐藻胶的降解方法第13-14页
    1.3 褐藻胶寡糖的应用与前景第14-16页
    1.4 褐藻胶裂解酶第16-22页
        1.4.1 褐藻胶裂解酶的来源与分类第16-17页
        1.4.2 褐藻胶裂解酶的结构第17-18页
        1.4.3 褐藻胶裂解酶底物特异性及与结构的关系第18-20页
        1.4.4 褐藻胶裂解酶活性检测方法第20-21页
        1.4.5 褐藻胶裂解酶的功能与应用前景第21-22页
    1.5 褐藻产生物乙醇的研究现状第22-24页
    1.6 本课题的研究内容及研究意义第24-25页
2 褐藻胶降解菌的筛选、鉴定及产酶条件优化第25-38页
    2.1 引言第25页
    2.2 材料第25-27页
        2.2.1 主要实验仪器第25-26页
        2.2.2 主要实验试剂第26页
        2.2.3 培养基第26-27页
    2.3 实验方法第27-29页
        2.3.1 菌种来源第27页
        2.3.2 褐藻胶降解菌的筛选第27页
        2.3.3 菌种保藏第27页
        2.3.4 菌株鉴定与分析第27-28页
        2.3.5 产酶条件优化第28-29页
    2.4 结果与讨论第29-37页
        2.4.1 褐藻胶降解菌的筛选与鉴定第29-30页
        2.4.2 种子培养基菌株BH17的生长曲线第30-31页
        2.4.3 培养基成分优化第31-35页
        2.4.4 发酵条件的优化第35-37页
    2.5 小结第37-38页
3 褐藻胶裂解酶基因的克隆表达第38-51页
    3.1 引言第38页
    3.2 材料第38-40页
        3.2.1 菌株和质粒第38页
        3.2.2 培养基第38页
        3.2.4 试剂第38-39页
        3.2.5 主要实验仪器第39-40页
    3.3 实验方法第40-45页
        3.3.1 引物设计及序列比对第40-41页
        3.3.2 质粒提取与E.coliDH5α感受态的制备第41页
        3.3.3 PCR法扩增褐藻胶降解关键酶基因第41-42页
        3.3.4 重组载体的构建及转化第42-43页
        3.3.5 重组酶的表达及检测第43-44页
        3.3.6 重组酶的酶活测定方法第44页
        3.3.7 诱导条件的优化第44-45页
    3.4 结果与讨论第45-50页
        3.4.1 褐藻胶裂解酶基因的克隆及表达载体的构建第45-46页
        3.4.2 五株重组菌褐藻胶裂解酶的表达第46-47页
        3.4.3 五株重组菌褐藻胶裂解酶的酶活测定第47-48页
        3.4.4 rAlgV3诱导条件的优化第48-49页
        3.4.5 BL21-AlgV3的高密度培养及诱导表达第49-50页
    3.5 小结第50-51页
4 褐藻胶裂解酶的分离纯化与酶学性质第51-66页
    4.1 引言第51页
    4.2 实验材料第51-53页
        4.2.1 主要试验仪器第51-52页
        4.2.2 主要化学试剂第52页
        4.2.3 培养基第52-53页
    4.3 实验方法第53-57页
        4.3.1 重力柱纯化重组酶第53-54页
        4.3.2 重组酶rAlgV3酶活测定第54页
        4.3.3 WesternBloting验证第54页
        4.3.4 BCA法测定蛋白含量第54-55页
        4.3.5 重组酶rAlgV3的酶学性质第55-56页
        4.3.6 褐藻胶裂解酶降解产物ESI-MS分析第56-57页
    4.4 结果与分析第57-64页
        4.4.1 重组蛋白酶的分离纯化第57-58页
        4.4.2 重组酶rAlgV3的最适温度和热稳定性第58-59页
        4.4.3 重组酶rAlgV3的最适pH和pH稳定性第59-61页
        4.4.4 不同离子对重组酶rAlgV3酶活的影响第61-62页
        4.4.5 不同NaCl浓度对重组酶rAlgV3活性的影响第62页
        4.4.6 重组酶rAlgV3底物偏好性分析第62-64页
        4.4.7 褐藻胶裂解酶降解产物ESI-MS分析第64页
    4.5 小结第64-66页
结论第66-67页
展望第67-68页
参考文献第68-76页
附录A BH17基因序列第76-77页
附录B VMC35240基因及蛋白序列第77-79页
附录C rAlgV3基因及蛋白序列第79-81页
附录D 常用缓冲溶液的配制方法第81-83页
攻读硕士学位期间发表学术论文情况第83-84页
致谢第84-86页

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