| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 1 前言 | 第12-31页 |
| 1.1 红树林环境研究现状 | 第12-13页 |
| 1.1.1 红树林生态环境 | 第12页 |
| 1.1.2 红树林环境研究现状 | 第12-13页 |
| 1.2 纤维素与纤维素素 | 第13-15页 |
| 1.2.1 纤维素 | 第13-14页 |
| 1.2.2 纤维素酶 | 第14-15页 |
| 1.3 纤维素酶的分类与性质 | 第15-16页 |
| 1.3.1 纤维素酶的分类 | 第15-16页 |
| 1.3.2 纤维素酶的性质 | 第16页 |
| 1.4 纤维素酶的结构与作用机制 | 第16-19页 |
| 1.4.1 纤维素酶的结构 | 第16-17页 |
| 1.4.2 纤维素酶的作用机制 | 第17-19页 |
| 1.4.2.1 C_1-Cx假说 | 第17-18页 |
| 1.4.2.2 协同理论 | 第18页 |
| 1.4.2.3 顺序作用假说 | 第18-19页 |
| 1.5 纤维素酶的应用 | 第19-20页 |
| 1.5.1 纤维素酶在轻纺工业中的应用 | 第19页 |
| 1.5.2 纤维素酶在医药领域的应用 | 第19-20页 |
| 1.5.3 纤维素酶在废料处理及环境保护中的应用 | 第20页 |
| 1.6 纤维素酶的生产及分离纯化 | 第20-26页 |
| 1.6.1 产纤维素酶的微生物及其所产纤维素酶的酶系 | 第20-21页 |
| 1.6.2 生产纤维素酶的方法 | 第21-22页 |
| 1.6.2.1 固体发酵法(SSF) | 第22页 |
| 1.6.2.2 液体发酵法(LSF) | 第22页 |
| 1.6.3 纤维素酶的分离纯化及其研究进展 | 第22-26页 |
| 1.7 纤维素酶基因的克隆与表达及外切纤维素酶研究现状 | 第26-28页 |
| 1.7.1 纤维素酶基因的克隆与表达 | 第26-27页 |
| 1.7.2 CBH的研究进展 | 第27-28页 |
| 1.8 降解木质纤维素的青霉 | 第28-30页 |
| 1.8.1 降解木质纤维素的青霉 | 第28-29页 |
| 1.8.2 青霉木质纤维素酶系的合成调控 | 第29-30页 |
| 1.8.3 产紫青霉HBZ003产纤维素酶系特点 | 第30页 |
| 1.9 论文研究目的与主要内容 | 第30-31页 |
| 1.9.1 论文的研究目的与意义 | 第30-31页 |
| 1.9.2 论文的主要内容 | 第31页 |
| 2 材料与方法 | 第31-44页 |
| 2.1 材料 | 第31-33页 |
| 2.1.1 实验所用菌株 | 第31-32页 |
| 2.1.2 主要的试剂与药品 | 第32页 |
| 2.1.3 常用仪器 | 第32页 |
| 2.1.4 PCR引物 | 第32-33页 |
| 2.2 培养基 | 第33页 |
| 2.2.1 菌种保存与复壮培养基 | 第33页 |
| 2.2.2 种子培养基 | 第33页 |
| 2.3 主要试剂及其配制方法 | 第33-35页 |
| 2.3.1 葡萄糖标准溶液(1mg/ml) | 第33-34页 |
| 2.3.2 蛋白标准溶液(1mg/ml) | 第34页 |
| 2.3.3 DNS试剂(QB2583 2003 附录 A (FPA)滤纸酶活力的测定方法) | 第34页 |
| 2.3.4 考马斯亮蓝试剂 | 第34页 |
| 2.3.5 醋酸-醋酸钠缓冲溶液(pH5.0) | 第34页 |
| 2.3.6 1%的CMC、1%水杨苷及1%微晶纤维素溶液(pH5.0) | 第34页 |
| 2.3.7 0.5M,pH6.8的Tris-HCl缓冲液 | 第34页 |
| 2.3.8 1.5M,pH8.8的Tris-HCl缓冲液 | 第34页 |
| 2.3.9 0.5%(W/V)溴酚兰 | 第34-35页 |
| 2.3.10 10%AP溶液 | 第35页 |
| 2.3.11 10%SDS溶液 | 第35页 |
| 2.3.12 电极缓冲液 | 第35页 |
| 2.3.13 样品缓冲液 | 第35页 |
| 2.3.14 30%的Acr/Bis贮液(30% T、2.67% C) | 第35页 |
| 2.3.15 染色液 | 第35页 |
| 2.4 实验方法 | 第35-44页 |
| 2.4.1 酶活力的测定 | 第35-37页 |
| 2.4.2 蛋白含量的测定 | 第37页 |
| 2.4.3 菌种复壮 | 第37页 |
| 2.4.4 针对CBH的发酵条件优化 | 第37-39页 |
| 2.4.5 纤维素酶组分的分离纯化 | 第39-42页 |
| 2.4.6 SDS-PAGE凝胶电泳(操作过程) | 第42页 |
| 2.4.7 CBH部分酶学性质分析 | 第42-43页 |
| 2.4.8 产紫青霉HBZ003的CBH Ⅰ基因克隆 | 第43-44页 |
| 3 结果与分析 | 第44-63页 |
| 3.1 葡萄糖标准曲线 | 第44页 |
| 3.2 蛋白质标准曲线 | 第44页 |
| 3.3 菌种复壮后酶活力情况 | 第44-46页 |
| 3.4 针对CBH活力的发酵条件优化 | 第46-52页 |
| 3.4.1 氮源对CBH活力的影响 | 第46页 |
| 3.4.2 碳源对CBH活力的影响 | 第46-47页 |
| 3.4.3 复合碳源对CBH活力的影响 | 第47页 |
| 3.4.4 无机盐对CBH活力的影响 | 第47-50页 |
| 3.4.9 装液量对CBH活力的影响 | 第50-51页 |
| 3.4.10 发酵时间CBH活力的影响 | 第51页 |
| 3.4.11 表面活性剂对CBH活力的影响 | 第51-52页 |
| 3.5 HBZ003产酶的分离纯化 | 第52-55页 |
| 3.5.1 不同种类,不同pH及不同浓度缓冲液体系对酶活力影响 | 第52-53页 |
| 3.5.2 最佳盐析条件 | 第53-54页 |
| 3.5.3 Sephadex G-100凝胶柱层析 | 第54页 |
| 3.5.4 CBH的分离纯化结果 | 第54-55页 |
| 3.6 CBH酶学性质研究 | 第55-57页 |
| 3.6.1 分子量 | 第55-56页 |
| 3.6.2 热稳定性 | 第56页 |
| 3.6.3 CBH反应最适温度 | 第56-57页 |
| 3.6.4 CBH反应最适pH值 | 第57页 |
| 3.6.5 部分金属离子对CBH活力影响 | 第57页 |
| 3.7 产紫青霉HBZ003的CBH基因克隆 | 第57-63页 |
| 3.7.1 基因组DNA提取、RNA提取及其反转录 | 第57-58页 |
| 3.7.2 CF/CR引物对扩增CBH Ⅰ基因 | 第58-59页 |
| 3.7.3 第二批五对引物PCR扩增CBH Ⅰ基因 | 第59-63页 |
| 4 讨论 | 第63-66页 |
| 4.1 关于纤维素酶活力的测定 | 第63页 |
| 4.2 关于针对CBH活力的发酵培养基及条件优化 | 第63-64页 |
| 4.3 关于CBH组分的分离纯化 | 第64-65页 |
| 4.4 关于CBH酶学性质研究 | 第65页 |
| 4.5 关于纤维二糖水解酶的基因克隆 | 第65页 |
| 4.6 关于后续研究 | 第65-66页 |
| 5 结论 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-77页 |
| 致谢 | 第77页 |
