| 摘要 | 第3-4页 |
| ABSTRACT | 第4-5页 |
| 目录 | 第6-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-25页 |
| 1.1 甜菊苷研究概况 | 第10-15页 |
| 1.1.1 研究概述 | 第10-12页 |
| 1.1.2 甜菊苷的酶法修饰 | 第12-14页 |
| 1.1.3 微生物糖基化法 | 第14页 |
| 1.1.4 甜菊苷的酶法合成 | 第14-15页 |
| 1.1.5 甜菊苷转化酶的纯化 | 第15页 |
| 1.2 甜茶苷研究概况 | 第15-17页 |
| 1.2.1 研究概述 | 第15-16页 |
| 1.2.2 甜茶苷的提取与纯化 | 第16页 |
| 1.2.3 甜茶苷的功能 | 第16-17页 |
| 1.3 酶的分离纯化与化学修饰 | 第17-23页 |
| 1.3.1 沉淀 | 第17-18页 |
| 1.3.2 层析 | 第18-21页 |
| 1.3.3 凝胶电泳 | 第21-22页 |
| 1.3.4 酶的化学修饰 | 第22-23页 |
| 1.4 甜菊醇及其微生物转化 | 第23-24页 |
| 1.4.1 甜菊醇的作用 | 第23-24页 |
| 1.4.2 甜菊醇的微生物转化 | 第24页 |
| 1.5 研究目的与意义 | 第24-25页 |
| 第二章 甜菊苷转化酶的分离纯化 | 第25-47页 |
| 2.1 材料与设备 | 第26-27页 |
| 2.1.1 实验菌种 | 第26页 |
| 2.1.2 菌种培养基 | 第26页 |
| 2.1.3 实验药品 | 第26页 |
| 2.1.4 仪器与设备 | 第26-27页 |
| 2.2 实验方法 | 第27-33页 |
| 2.2.1 菌体与酶液的制备 | 第27页 |
| 2.2.2 酶活力的测定 | 第27页 |
| 2.2.3 蛋白质标准曲线的制定 | 第27-28页 |
| 2.2.4 七叶灵鉴定β-葡萄糖苷酶 | 第28页 |
| 2.2.5 硫酸铵盐析 | 第28页 |
| 2.2.6 蛋白质透析 | 第28-29页 |
| 2.2.7 Phenyl-Sepharose CL-4B疏水层析 | 第29-30页 |
| 2.2.8 DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换层析 | 第30-31页 |
| 2.2.9 Sephacry S-200HR分子筛层析 | 第31页 |
| 2.2.10 酶纯度鉴定 | 第31-33页 |
| 2.3 结果与分析 | 第33-45页 |
| 2.3.1 酶活力测定 | 第33页 |
| 2.3.2 蛋白质标准曲线 | 第33-34页 |
| 2.3.3 七叶灵鉴定β-葡萄糖苷酶的存在 | 第34页 |
| 2.3.4 硫酸铵分级沉淀 | 第34-35页 |
| 2.3.5 Phenyl-Sepharose CL-4B疏水层析条件的探索 | 第35-37页 |
| 2.3.6 DEAE-Sepharose Fast FLow离子交换条件 | 第37-41页 |
| 2.3.7 蛋白分子量的测定 | 第41页 |
| 2.3.8 Sephacry S-200HR分子筛条件的探索 | 第41-42页 |
| 2.3.9 酶液的纯化结果 | 第42页 |
| 2.3.10 Nano LC-MS/MS鉴定蛋白质 | 第42-45页 |
| 2.4 本章小结 | 第45-47页 |
| 第三章 甜菊苷转化酶的性质研究 | 第47-53页 |
| 3.1 材料与设备 | 第47页 |
| 3.1.1 酶液与药品 | 第47页 |
| 3.1.2 仪器与设备 | 第47页 |
| 3.2 实验方法 | 第47-48页 |
| 3.2.1 酶活性测定 | 第47页 |
| 3.2.2 酶最适反应温度的测定 | 第47页 |
| 3.2.3 温度对酶稳定性的影响 | 第47页 |
| 3.2.4 酶最适反应pH的测定 | 第47-48页 |
| 3.2.5 pH对酶稳定性的影响 | 第48页 |
| 3.2.6 金属离子对酶活性的影响 | 第48页 |
| 3.2.7 酶的底物特异性 | 第48页 |
| 3.2.8 有机溶剂对酶活性的影响 | 第48页 |
| 3.3 结果与分析 | 第48-52页 |
| 3.3.1 pH对酶活性的影响 | 第48-49页 |
| 3.3.2 pH对酶稳定性的影响 | 第49页 |
| 3.3.3 温度对酶活性的影响 | 第49-50页 |
| 3.3.4 温度对酶稳定性的影响 | 第50页 |
| 3.3.5 金属离子对酶活力的影响 | 第50-51页 |
| 3.3.6 酶的底物特异性 | 第51页 |
| 3.3.7 有机溶剂对酶活力的影响 | 第51-52页 |
| 3.4 本章小结 | 第52-53页 |
| 第四章 甜菊苷转化酶的活性部位探讨 | 第53-58页 |
| 4.1 材料与设备 | 第54页 |
| 4.1.1 实验试剂 | 第54页 |
| 4.1.2 仪器与设备 | 第54页 |
| 4.2 实验方法 | 第54-55页 |
| 4.2.1 HPLC检测SS的转化率 | 第54页 |
| 4.2.2 二硫键的化学修饰 | 第54页 |
| 4.2.3 半胱氨酸巯基的化学修饰 | 第54页 |
| 4.2.4 丝氨酸羰基的化学修饰 | 第54页 |
| 4.2.5 EDTA的化学修饰 | 第54-55页 |
| 4.3 结果与分析 | 第55-57页 |
| 4.3.1 二硫键的化学修饰 | 第55页 |
| 4.3.2 半胱氨酸巯基的化学修饰 | 第55-56页 |
| 4.3.3 丝氨酸羰基的化学修饰 | 第56-57页 |
| 4.3.4 EDTA对酶活力的影响 | 第57页 |
| 4.4 本章小结 | 第57-58页 |
| 第五章 转化甜菊醇的微生物筛选与鉴定 | 第58-69页 |
| 5.1 菌种与原料 | 第58页 |
| 5.1.1 菌种与原料 | 第58页 |
| 5.1.2 菌种培养基 | 第58页 |
| 5.1.3 主要试剂 | 第58页 |
| 5.2 仪器与设备 | 第58-59页 |
| 5.3 实验方法 | 第59页 |
| 5.3.1 微生物对甜菊糖的转化 | 第59页 |
| 5.3.2 菌种的分子生物学鉴定 | 第59页 |
| 5.3.3 甜菊糖的检测 | 第59页 |
| 5.4 结果与分析 | 第59-68页 |
| 5.4.1 微生物筛选 | 第59-61页 |
| 5.4.2 XJ菌的鉴定 | 第61-63页 |
| 5.4.3 菌体的转化特性 | 第63-64页 |
| 5.4.4 甜菊糖的转化产物分析 | 第64-65页 |
| 5.4.5 转化的中间产物及次序 | 第65-66页 |
| 5.4.6 菌体的生长曲线 | 第66页 |
| 5.4.7 接种量对SS转化率的影响 | 第66-67页 |
| 5.4.8 诱导对SS转化的影响 | 第67页 |
| 5.4.9 转化产物的含量变化 | 第67-68页 |
| 5.4.10 甜菊醇的分离纯化 | 第68页 |
| 5.5 本章小结 | 第68-69页 |
| 第六章 结论与展望 | 第69-70页 |
| 6.1 结论 | 第69页 |
| 6.2 展望 | 第69-70页 |
| 附录 | 第70-73页 |
| 参考文献 | 第73-83页 |
| 发表的论文和申请的专利 | 第83-84页 |
| 致谢 | 第84页 |
