| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-10页 |
| 1 前言 | 第10-23页 |
| ·嘧啶核苷概述 | 第10-11页 |
| ·结构及理化性质 | 第10页 |
| ·用途 | 第10-11页 |
| ·测定方法 | 第11页 |
| ·嘧啶核苷的生产方法 | 第11-12页 |
| ·RNA水解法 | 第11页 |
| ·化学合成法 | 第11页 |
| ·微生物发酵法 | 第11-12页 |
| ·嘧啶核苷的生物合成及代谢调节机制 | 第12-17页 |
| ·枯草芽孢杆菌中嘧啶核苷的从头合成途径 | 第12-13页 |
| ·枯草芽孢杆菌中嘧啶核苷的补救合成途径 | 第13页 |
| ·pyrR编码的阻遏蛋白介导的操纵子转录弱化调控 | 第13-14页 |
| ·氨甲酰磷酸合成酶的变构调节 | 第14-15页 |
| ·pyrG基因的转录弱化调控 | 第15-16页 |
| ·UMP激酶 | 第16-17页 |
| ·5’-核苷酸酶 | 第17页 |
| ·发酵培养基优化策略 | 第17-18页 |
| ·嘧啶核苷产生菌的育种策略及育种实例 | 第18-21页 |
| ·育种策略 | 第18-19页 |
| ·育种实例 | 第19-21页 |
| ·立题背景及研究内容 | 第21-23页 |
| ·立题背景 | 第21页 |
| ·本论文主要研究内容 | 第21-23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-34页 |
| ·实验材料 | 第23-27页 |
| ·菌株和质粒 | 第23页 |
| ·引物 | 第23-24页 |
| ·主要仪器 | 第24页 |
| ·主要试剂 | 第24-25页 |
| ·主要溶液 | 第25-26页 |
| ·主要培养基 | 第26-27页 |
| ·实验方法 | 第27-34页 |
| ·枯草芽孢杆菌基因组DNA的小量提取 | 第27页 |
| ·质粒DNA的小量提取 | 第27-28页 |
| ·目的基因的扩增 | 第28-29页 |
| ·DNA的酶切 | 第29页 |
| ·DNA的连接 | 第29页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第29-30页 |
| ·DNA的回收纯化 | 第30页 |
| ·大肠杆菌化转感受态细胞的制备及转化 | 第30-31页 |
| ·枯草芽孢杆菌电转感受态细胞的制备及转化 | 第31-32页 |
| ·枯草芽孢杆菌发酵生产嘧啶核苷的培养方法及分析检测方法 | 第32-34页 |
| 3 结果与讨论 | 第34-53页 |
| ·Bacillus subtilis 168菌株cdd基因的敲除 | 第34-39页 |
| ·同源臂的扩增 | 第34-35页 |
| ·重组质粒pKS1△cdd的构建 | 第35-37页 |
| ·cdd基因缺失突变株的构建 | 第37-39页 |
| ·小结与讨论 | 第39页 |
| ·嘧啶核苷基因工程菌的摇瓶发酵 | 第39-46页 |
| ·hom和pyrR基因的敲除对菌株产苷的影响 | 第39-41页 |
| ·pdp和nupC基因的敲除对菌株产苷的影响 | 第41-42页 |
| ·野生型及突变型prs基因的过表达对菌株产苷的影响 | 第42-44页 |
| ·pyrAB基因的定点突变对菌株产苷的影响 | 第44-46页 |
| ·小结与讨论 | 第46页 |
| ·响应面法优化发酵培养基 | 第46-53页 |
| ·PB(Plackett-Burman)设计筛选影响产苷的显著因素 | 第46-47页 |
| ·最陡爬坡实验寻找响应面分析中心点 | 第47-48页 |
| ·利用CCD进行响应面分析 | 第48-50页 |
| ·模型的验证 | 第50-51页 |
| ·小结与讨论 | 第51-53页 |
| 4 结论 | 第53-54页 |
| 5 展望 | 第54-55页 |
| 6 参考文献 | 第55-62页 |
| 7 研究生期间发表论文情况 | 第62-63页 |
| 8 致谢 | 第63页 |
