| 摘要 | 第1-16页 |
| ABSTRACT | 第16-20页 |
| 符号说明以及縮写词 | 第20-23页 |
| 第一章 文献综述 | 第23-46页 |
| ·PHA概述 | 第23-28页 |
| ·PHA的组成和分类 | 第23-24页 |
| ·PHA的微生物合成 | 第24-26页 |
| ·PHA的物理化学特性和应用 | 第26-28页 |
| ·聚硫脂(PTE) | 第28-40页 |
| ·PTE的化学合成 | 第28-31页 |
| ·微生物法合成聚硫脂 | 第31-32页 |
| ·微生物硫脂共聚物(PTE copolymer) | 第31页 |
| ·微生物硫脂均聚物(PTE homopolymer) | 第31-32页 |
| ·微生物PTE合成的代谢途径 | 第32-33页 |
| ·微生物PTE鉴定分析方法和物理特性 | 第33-36页 |
| ·微生物PTE的不可降解性 | 第36-37页 |
| ·PTE前体底物 | 第37-40页 |
| ·DTDP降解菌A.mimigardfordensis DPN7~T | 第40-44页 |
| ·菌株的获得和鉴定 | 第41-42页 |
| ·DTDP降解途径的发现和鉴定 | 第42-44页 |
| ·本论文的研究工作和意义 | 第44-46页 |
| 第二章 合成PMP的A.mimigardefordensis菌株的初步构建 | 第46-81页 |
| ·实验材料 | 第49-56页 |
| ·菌株、质粒和引物 | 第49-51页 |
| ·菌株和质粒 | 第49-50页 |
| ·引物 | 第50-51页 |
| ·培养基 | 第51-52页 |
| ·抗生素 | 第52-53页 |
| ·试验中常用的工具酶 | 第53页 |
| ·常用的试剂盒 | 第53页 |
| ·常用的试剂 | 第53页 |
| ·分子量标记物 | 第53页 |
| ·聚合酶链式反应(PCR) | 第53-54页 |
| ·仪器和设备 | 第54页 |
| ·常用的试剂配方 | 第54-56页 |
| ·实验方法 | 第56-62页 |
| ·菌种保存方法 | 第56页 |
| ·分子生物学常规操作 | 第56-57页 |
| ·基因的克隆构建 | 第56页 |
| ·用于基因敲除的自杀质粒的构建 | 第56-57页 |
| ·DNA测序和序列分析 | 第57页 |
| ·感受态制备,DNA转入细胞方法以及基因敲除方法 | 第57-60页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第57页 |
| ·大肠杆菌的常规转化 | 第57页 |
| ·大肠杆菌到A.mimigardefordensis菌株结合转移 | 第57-58页 |
| ·A.mimigardefordensis菌株之间的电转化方法 | 第58页 |
| ·利用自杀质粒对A.mimigardefordensis菌株内基因的精确敲除的方法 | 第58-60页 |
| ·不同菌株的用途,培养方法和菌浓检测方法 | 第60-61页 |
| ·PHA以及PMP的GC检测 | 第61-62页 |
| ·PHA和PMP的GC/MS分析 | 第62页 |
| ·HPLC对发酵液上清分析 | 第62页 |
| ·实验结果 | 第62-77页 |
| ·菌株和重组质粒系统的选择 | 第62-64页 |
| ·3MP,3HB以及3HV的GC检测标准曲线的构建 | 第64-65页 |
| ·重组质粒pBBR1MCS5：：BPEC的构建和验证 | 第65-66页 |
| ·菌株SHX1,STn5-1S,STn5-2S出现的问题 | 第66-69页 |
| ·菌株SHX1的PMP生产初步尝试 | 第69-72页 |
| ·buk-ptb操纵子对菌株生长抑制作用的发现 | 第72-73页 |
| ·mdo基因的敲除、buk-ptb操纵子整合和recA基因敲除 | 第73-75页 |
| ·RT-PCR验证 | 第75-76页 |
| ·重组优化菌株进行PMP合成 | 第76-77页 |
| ·讨论 | 第77-79页 |
| ·本章小结 | 第79-81页 |
| 第三章 A.mimigardefordensis菌株合成PMP的优化 | 第81-117页 |
| ·实验材料 | 第81-84页 |
| ·菌株、质粒和引物 | 第81-84页 |
| ·菌株和质粒 | 第81-83页 |
| ·引物 | 第83-84页 |
| ·实验方法 | 第84-85页 |
| ·基因的克隆构建 | 第84页 |
| ·用于基因敲除和基因插入的自杀质粒的构建 | 第84页 |
| ·不同菌株的用途和培养方法 | 第84-85页 |
| ·实验结果 | 第85-110页 |
| ·碳源的优化 | 第85-91页 |
| ·单一碳源的尝试 | 第85-87页 |
| ·甘油和丙酸钠作为混合碳源的优缺点 | 第87-91页 |
| ·发酵方式的优化 | 第91-96页 |
| ·带有挡板的摇瓶不适合A.mimigardefordensis发酵 | 第91-92页 |
| ·一阶法发酵的尝试和缺点 | 第92-94页 |
| ·二阶培养法中第一阶培养终点的优化 | 第94-96页 |
| ·菌株SHX5发酵中各成分随时间的变化分析 | 第96-97页 |
| ·新PMP合成途径的发现与优化 | 第97-105页 |
| ·关键酶PhaC_(Am)的发现以及和重组表达的同工酶PhaEC活力比较 | 第97-99页 |
| ·不同来源PHA合成酶活力的比较分析 | 第99-101页 |
| ·内源PHA合成酶的优化提高了PMP含量 | 第101-103页 |
| ·PHA合成酶含量的最优化选择 | 第103-105页 |
| ·PMP高产菌株SHX22批次摇瓶发酵中各组分随时间的变化分析 | 第105-106页 |
| ·3MP“相对剩余”现象的解决策略 | 第106-110页 |
| ·三种策略的提出 | 第106-108页 |
| ·降低DTDP浓度(策略B)的实验结果 | 第108-109页 |
| ·催化3MP变为3MP-CoA的酶的寻找(策略C) | 第109-110页 |
| ·讨论 | 第110-115页 |
| ·本章小结 | 第115-117页 |
| 第四章 均聚物PMP提纯和鉴定 | 第117-130页 |
| ·背景简介 | 第117-121页 |
| ·PHA定性鉴定方法 | 第117页 |
| ·PHA和PMP的纯化方法 | 第117-118页 |
| ·活性PHA颗粒和PMP颗粒简介 | 第118-121页 |
| ·本章研究工作 | 第121页 |
| ·实验方法 | 第121-124页 |
| ·尼罗红染色 | 第121页 |
| ·PMP的提取实验 | 第121页 |
| ·甘油密度梯度离心提取PMP颗粒 | 第121-122页 |
| ·PMP颗粒上的蛋白SDS-PAGE分析 | 第122-124页 |
| ·非特异性的蛋白考马斯亮蓝染色 | 第124页 |
| ·实验结果 | 第124-127页 |
| ·活性PMP颗粒的观察 | 第125页 |
| ·活性PMP颗粒纯化以及颗粒上嵌入蛋白的初步分析 | 第125-126页 |
| ·PMP的纯化和鉴定 | 第126-127页 |
| ·结果讨论 | 第127-128页 |
| ·本章小结 | 第128-130页 |
| 创新型成果和展望 | 第130-131页 |
| 参考文献 | 第131-139页 |
| 致谢 | 第139-140页 |
| 攻读学位期间发表的论文 | 第140-141页 |
| 附件 | 第141-186页 |
