| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 英文略词与译名 | 第8-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-26页 |
| 1.1 研究目的和意义 | 第13-15页 |
| 1.1.1 几丁质 | 第13-14页 |
| 1.1.2 几丁寡糖 | 第14页 |
| 1.1.3 几丁质酶 | 第14-15页 |
| 1.2 研究现状和进展 | 第15-23页 |
| 1.2.1 几丁质酶研究进展 | 第15-23页 |
| 1.3 研究目标与内容 | 第23-26页 |
| 1.3.1 研究内容 | 第24-25页 |
| 1.3.2 研究目标 | 第25-26页 |
| 第二章 产几丁质酶菌株的筛选鉴定及其产酶条件的优化 | 第26-49页 |
| 2.1 前言 | 第26页 |
| 2.2 材料与方法 | 第26-31页 |
| 2.2.1 主要仪器和试剂 | 第26-27页 |
| 2.2.2 胶体几丁质的制备 | 第27页 |
| 2.2.3 产几丁质酶菌株的筛选 | 第27页 |
| 2.2.4 16S rDNA序列测定及系统发育树分析 | 第27-28页 |
| 2.2.5 产几丁质酶发酵条件的优化 | 第28-29页 |
| 2.2.6 几丁质酶活力及蛋白含量的测定 | 第29页 |
| 2.2.7 SDS-PAGE及酶谱分析 | 第29页 |
| 2.2.8 天然几丁质酶PbChi67的纯化 | 第29-30页 |
| 2.2.9 几丁质酶分子量测定 | 第30页 |
| 2.2.10 几丁质酶的最适pH和pH稳定性 | 第30页 |
| 2.2.11 几丁质酶最适反应温度、温度稳定性和半衰期 | 第30-31页 |
| 2.2.12 金属离子及其它化合物对酶活力的影响 | 第31页 |
| 2.2.13 底物特异性和动力学常数 | 第31页 |
| 2.2.14 水解特性研究 | 第31页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第31-47页 |
| 2.3.1 产几丁质酶菌株的筛选 | 第31-32页 |
| 2.3.2 菌株16S rDNA序列全长分析及鉴定结果 | 第32-33页 |
| 2.3.3 菌株生理生化特征 | 第33-34页 |
| 2.3.4 巴伦葛兹类芽孢杆菌CAU904产几丁质酶的发酵优化 | 第34-40页 |
| 2.3.5 巴伦葛兹类芽孢杆菌CAU904几丁质酶的纯化 | 第40-41页 |
| 2.3.6 几丁质酶分子量测定 | 第41-42页 |
| 2.3.7 天然几丁质酶PbChi67的最适pH及pH稳定性测定 | 第42-43页 |
| 2.3.8 天然几丁质酶PbChi67的最适温度及温度稳定性测定 | 第43-44页 |
| 2.3.9 金属离子及化合物对天然几丁质酶PbChi67的影响测定 | 第44-45页 |
| 2.3.10 天然几丁质酶PbChi67的底物特异性 | 第45-46页 |
| 2.3.11 天然几丁质酶PbChi67的动力学测定 | 第46页 |
| 2.3.12 天然几丁质酶PbChi67的水解特性 | 第46-47页 |
| 2.4 本章小结 | 第47-49页 |
| 第三章 巴伦葛兹类芽孢杆菌几丁质酶基因的克隆、纯化和性质测定 | 第49-72页 |
| 3.1 前言 | 第49页 |
| 3.2 材料与方法 | 第49-57页 |
| 3.2.1 主要仪器和试剂 | 第49-50页 |
| 3.2.2 菌株和质粒 | 第50页 |
| 3.2.3 培养基 | 第50-51页 |
| 3.2.4 类芽孢杆菌基因组DNA的提取 | 第51页 |
| 3.2.5 简并引物设计 | 第51页 |
| 3.2.6 PCR扩增几丁质酶保守区片段 | 第51页 |
| 3.2.7 几丁质酶基因全长序列的扩增 | 第51-53页 |
| 3.2.8 几丁质酶基因完整ORF扩增 | 第53页 |
| 3.2.9 几丁质酶基因在大肠杆菌中表达 | 第53页 |
| 3.2.10 重组质粒表达 | 第53-54页 |
| 3.2.11 几丁质酶基因序列和氨基酸序列分析 | 第54页 |
| 3.2.12 几丁质酶基因PbChi74在E.coli中的表达 | 第54页 |
| 3.2.13 重组几丁质酶PbChi74的纯化 | 第54页 |
| 3.2.14 重组几丁质酶分子量及酶谱测定 | 第54-55页 |
| 3.2.15 重组几丁质酶PbChi74的性质 | 第55页 |
| 3.2.16 重组几丁质酶PbChi74底物特异性及动力学常数 | 第55-56页 |
| 3.2.17 重组几丁质酶PbChi74的水解特性 | 第56页 |
| 3.2.18 重组几丁质酶PbChi74的转糖苷特性 | 第56页 |
| 3.2.19 重组几丁质酶PbChi74转化几丁质产N-乙酰氨基葡萄糖 | 第56-57页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第57-70页 |
| 3.3.1 几丁质酶基因保守区片段PCR扩增 | 第57页 |
| 3.3.2 hiTAIL-PCR扩增几丁质酶基因全长序列 | 第57-58页 |
| 3.3.3 几丁质酶基因和氨基酸序列分析 | 第58-60页 |
| 3.3.4 几丁质酶基因PbChi74在E.coli中的表达 | 第60页 |
| 3.3.5 重组几丁质酶PbChi74的纯化及分子量测定 | 第60-62页 |
| 3.3.6 重组几丁质酶PbChi74的性质 | 第62-65页 |
| 3.3.7 几丁质酶PbChi74的水解特性 | 第65-67页 |
| 3.3.8 重组几丁质酶PbChi74协同N-乙酰氨基葡萄糖苷酶产几丁单糖 | 第67-69页 |
| 3.3.9 重组几丁质酶PbChi74产几丁单糖的纯化与鉴定 | 第69-70页 |
| 3.4 本章小结 | 第70-72页 |
| 第四章 米黑根毛霉几丁质酶基因的克隆、表达及重组酶纯化、性质研究 | 第72-92页 |
| 4.1 引言 | 第72页 |
| 4.2 材料与方法 | 第72-79页 |
| 4.2.1 主要仪器和试剂 | 第72-73页 |
| 4.2.2 菌株和质粒 | 第73页 |
| 4.2.3 培养基 | 第73-74页 |
| 4.2.4 米黑根毛霉总RNA的提取及mRNA纯化 | 第74页 |
| 4.2.5 米黑根毛霉基因组DNA提取 | 第74-75页 |
| 4.2.6 几丁质酶基因组保守区片段PCR扩增 | 第75-77页 |
| 4.2.7 重组几丁质酶RmChi44的纯化 | 第77页 |
| 4.2.8 重组几丁质酶RmChi44的性质 | 第77-78页 |
| 4.2.9 重组几丁质酶RmChi44的底物特异性及动力学常数测定 | 第78页 |
| 4.2.10 重组几丁质酶RmChi44的水解特性 | 第78-79页 |
| 4.2.11 重组几丁质酶RmChi44的抑菌特性 | 第79页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第79-91页 |
| 4.3.1 几丁质酶的克隆和氨基酸序列分析 | 第79-82页 |
| 4.3.2 几丁质酶基因RmChi44在E.coli中表达 | 第82-83页 |
| 4.3.3 重组几丁质酶RmChi44的纯化及分子量测定 | 第83-84页 |
| 4.3.4 几丁质酶RmChi44的最适pH和pH稳定性测定 | 第84-85页 |
| 4.3.5 几丁质酶RmChi44的最适温度、温度稳定性及半衰期测定 | 第85-86页 |
| 4.3.6 金属离子及有化合物对几丁质酶RmChi44的影响 | 第86-87页 |
| 4.3.7 几丁质酶RmChi44的底物特异性及动力学常数测定 | 第87-88页 |
| 4.3.8 几丁质酶RmChi44的水解特性 | 第88-90页 |
| 4.3.9 几丁质酶RmChi44的抑菌特性 | 第90-91页 |
| 4.4 本章小结 | 第91-92页 |
| 第五章 结论与建议 | 第92-94页 |
| 5.1 结论 | 第92-93页 |
| 5.2 论文创新点 | 第93页 |
| 5.3 建议 | 第93-94页 |
| 参考文献 | 第94-101页 |
| 致谢 | 第101-102页 |
| 个人简介 | 第102页 |
