| 摘要 | 第6-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 1 绪论 | 第17-39页 |
| 1.1 单核细胞增生李斯特菌与李斯特菌病 | 第17-20页 |
| 1.1.1 单核细胞增生李斯特菌生物学特征 | 第17-18页 |
| 1.1.2 单核细胞增生李斯特菌的分布 | 第18页 |
| 1.1.3 李斯特菌病的临床特征 | 第18-19页 |
| 1.1.4 李斯特菌病的流行病学调查 | 第19-20页 |
| 1.2 单核细胞增生李斯特菌检测技术研究进展 | 第20-25页 |
| 1.2.1 传统分离鉴定方法 | 第20-21页 |
| 1.2.2 免疫学检测方法 | 第21页 |
| 1.2.3 核酸探针检测方法 | 第21-22页 |
| 1.2.4 PCR 检测方法 | 第22-25页 |
| 1.3 单核细胞增生李斯特菌 PCR 检测靶点 | 第25-27页 |
| 1.4 扩增内标在 PCR 检测技术中的应用 | 第27-31页 |
| 1.4.1 PCR 产物突变法 | 第28-29页 |
| 1.4.2 复合引物法 | 第29-30页 |
| 1.4.3 重叠 PCR 技术 | 第30-31页 |
| 1.5 生物信息学方法发掘检测靶点 | 第31-32页 |
| 参考文献 | 第32-39页 |
| 2 单核细胞增生李斯特菌 PCR 检测靶点的筛选 | 第39-62页 |
| 前言 | 第39-40页 |
| 2.1 材料与方法 | 第40-49页 |
| 2.1.1 菌种 | 第40-42页 |
| 2.1.2 培养基及主要试剂配方 | 第42-43页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第43页 |
| 2.1.4 DNA 提取 | 第43-45页 |
| 2.1.5 利用生物信息学发掘检测靶点及引物设计 | 第45-48页 |
| 2.1.6 PCR 反应体系 | 第48页 |
| 2.1.7 特异性评价 | 第48页 |
| 2.1.8 灵敏度评价 | 第48-49页 |
| 2.2 结果 | 第49-57页 |
| 2.2.1 检测靶点的挖掘 | 第49-51页 |
| 2.2.2 特异性评价 | 第51-54页 |
| 2.2.3 灵敏度评价 | 第54-57页 |
| 2.3 讨论 | 第57-59页 |
| 参考文献 | 第59-62页 |
| 3 含内标的单核细胞增生李斯特菌 PCR 检测方法的建立 | 第62-79页 |
| 前言 | 第62页 |
| 3.1 材料 | 第62-64页 |
| 3.1.1 菌种和质粒 | 第62-63页 |
| 3.1.2 培养基与试剂配制 | 第63页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第63-64页 |
| 3.2 方法 | 第64-69页 |
| 3.2.1 含内标的 PCR 检测体系的建立 | 第64-68页 |
| 3.2.2 人工污染牛奶样品实验 | 第68-69页 |
| 3.3 结果 | 第69-76页 |
| 3.3.1 不含内标的 PCR 检测体系优化 | 第69-70页 |
| 3.3.2 不含内标的 PCR 检测体系灵敏度 | 第70-71页 |
| 3.3.3 内标构建 | 第71-72页 |
| 3.3.4 含内标 PCR 反应体系的建立 | 第72-75页 |
| 3.3.5 人工污染牛奶样品实验 | 第75-76页 |
| 3.4 讨论 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-79页 |
| 4 单核细胞增生李斯特菌荧光定量 PCR 检测试剂盒的研制 | 第79-91页 |
| 前言 | 第79页 |
| 4.1 材料 | 第79-80页 |
| 4.1.1 菌种 | 第79页 |
| 4.1.2 主要试剂仪器与培养基 | 第79-80页 |
| 4.2 方法 | 第80-83页 |
| 4.2.1 试剂盒组成 | 第80页 |
| 4.2.2 探针、引物设计与合成 | 第80页 |
| 4.2.3 标准阳性模板的制备 | 第80-81页 |
| 4.2.4 DNA 模板的制备 | 第81页 |
| 4.2.5 荧光定量 PCR 反应体系及扩增反应条件 | 第81页 |
| 4.2.6 标准曲线的建立 | 第81-82页 |
| 4.2.7 试剂盒检测参数的评价 | 第82-83页 |
| 4.3 结果 | 第83-88页 |
| 4.3.1 试剂盒组装 | 第83页 |
| 4.3.2 标准曲线的建立 | 第83-84页 |
| 4.3.3 试剂盒检测参数的评价 | 第84-88页 |
| 4.4 讨论 | 第88-89页 |
| 参考文献 | 第89-91页 |
| 5 总结与展望 | 第91-93页 |
| 致谢 | 第93-95页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第95页 |
