| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 1 文献综述与立题依据 | 第13-24页 |
| 1.1 立题依据 | 第13-14页 |
| 1.2 半胱氨酸蛋白酶抑制剂(Cystatins)超家族概述 | 第14-15页 |
| 1.2.1 Cystatins超家族分类 | 第14页 |
| 1.2.2 Cystatin(家族Ⅰ)的结构 | 第14-15页 |
| 1.2.3 Cystatin(家族Ⅱ)的抑制机制 | 第15页 |
| 1.3 鱼类Cystatins研究进展 | 第15-18页 |
| 1.3.1 鱼类Cystatins的分布及鉴定 | 第15-16页 |
| 1.3.2 鱼类Cystatins的生理活性及功能 | 第16-18页 |
| 1.4 骨生长概述 | 第18-20页 |
| 1.4.1 骨的结构组成 | 第18页 |
| 1.4.2 骨重建过程与机制 | 第18-19页 |
| 1.4.3 破骨细胞的特征及功能 | 第19-20页 |
| 1.4.4 破骨细胞的体外培养 | 第20页 |
| 1.5 Cystatins调节骨生长的研究现状 | 第20-23页 |
| 1.5.1 Cystatins调节骨形成 | 第20-21页 |
| 1.5.2 Cystatins调节骨吸收 | 第21-22页 |
| 1.5.3 Cystatins调节骨吸收相关细胞因子 | 第22页 |
| 1.5.4 Cystatins调节骨生长相关细胞凋亡 | 第22-23页 |
| 1.6 研究内容与目的意义 | 第23-24页 |
| 2 材料 | 第24-27页 |
| 2.1 实验材料 | 第24页 |
| 2.2 主要仪器设备 | 第24页 |
| 2.3 主要实验试剂 | 第24-25页 |
| 2.4 常用溶液配制 | 第25-27页 |
| 3 方法 | 第27-33页 |
| 3.1 牛骨磨片的制作 | 第27页 |
| 3.1.1 骨片脱脂 | 第27页 |
| 3.1.2 磨片及消毒 | 第27页 |
| 3.2 OC的体外诱导及鉴定 | 第27-28页 |
| 3.2.1 体外诱导RAW264.7细胞分化为OC | 第27页 |
| 3.2.2 倒置相差显微镜观察细胞形态 | 第27页 |
| 3.2.3 HE染色 | 第27-28页 |
| 3.2.4 FITC phalloidin-Hochst | 第28页 |
| 3.2.5 免疫荧光检测降钙素受体(Calcitonin receptor CTR)表达 | 第28页 |
| 3.2.6 TRAP染色 | 第28页 |
| 3.3 鲢鱼鲢鱼Cystatin对OC分化形成的调节 | 第28-30页 |
| 3.3.1 实验分组 | 第28页 |
| 3.3.2 免疫荧光组化法检测微管蛋白环变化 | 第28-29页 |
| 3.3.3 Alexa Fluor546 phalloidin免疫荧光染色检测OC伪足小体变化 | 第29页 |
| 3.3.4 免疫荧光组化检测CTSK表达 | 第29页 |
| 3.3.5 间接ELISA检测培养液上清中CTSK浓度 | 第29-30页 |
| 3.3.6 微板法检测培养液上清Ca~(2+)浓度 | 第30页 |
| 3.4 鲢鱼Cystatin对成熟OC功能的调节 | 第30-32页 |
| 3.4.1 实验分组 | 第30页 |
| 3.4.2 免疫组化法检测微管蛋白环变化 | 第30页 |
| 3.4.3 Alexa Fluor546 phalloidin免疫荧光染色检测OC伪足小体变化 | 第30页 |
| 3.4.4 免疫巧光组化检测CTSK表达 | 第30-31页 |
| 3.4.5 间接ELISA检测培养液上清中CTSK浓度 | 第31页 |
| 3.4.6 微板法检测培养液上清Ca~(2+)浓度 | 第31页 |
| 3.4.7 Annexin V-FITC细胞凋亡染色 | 第31-32页 |
| 3.5 数据处理及统计分析 | 第32-33页 |
| 4 结果 | 第33-46页 |
| 4.1 OC的体外诱导及鉴定 | 第33-36页 |
| 4.1.1 倒置相差显微镜下观察细胞的形态学 | 第33页 |
| 4.1.2 HE染色观察诱导的OC的形态学 | 第33-34页 |
| 4.1.3 FITC-phalloidin染色观察RAW264.7细胞伪足小体变化 | 第34-35页 |
| 4.1.4 免疫荧光组织化学观察CTR表达 | 第35页 |
| 4.1.5 TRAP染色鉴定OC | 第35-36页 |
| 4.2 鲢鱼Cystatin对OC分化的调节 | 第36-41页 |
| 4.2.1 Alexa Fluor546-phalloidin检测OC伪足小体变化 | 第36-37页 |
| 4.2.2 免疫组化法检测OC微管蛋白环变化 | 第37-38页 |
| 4.2.3 CTSK免疫荧光组化法检测CTSK表达量的变化 | 第38-39页 |
| 4.2.4 间接ELISA检测培养液上清中CTSK表达量的变化 | 第39-40页 |
| 4.2.5 微板法检测培养液上清钙离子浓度的变化 | 第40-41页 |
| 4.3 鲢鱼Cystatin对成熟OC功能的调节 | 第41-46页 |
| 4.3.1 Alexa Fluor546- phalloidin检测OC伪足小体变化 | 第41-42页 |
| 4.3.2 免疫组化法检测OC微管蛋白环变化 | 第42-43页 |
| 4.3.3 免疫荧光组化法检测OC CTSK表达量变化 | 第43-44页 |
| 4.3.4 间接ELISA检测培养液上清中CTSK分泌量的变化 | 第44页 |
| 4.3.5 微板法检测培养液上清Ca~(2+)浓度的变化 | 第44-45页 |
| 4.3.6 Annexin V-FITC染色检测鲢鱼Cystatin对OC凋亡的影响 | 第45-46页 |
| 5 讨论 | 第46-52页 |
| 5.1 关于建立RAW264.7细胞分化形成OC高效培养体系 | 第46-48页 |
| 5.2 关于鲢鱼Cystatin对OC分化形成的影响 | 第48-49页 |
| 5.3 关于鲢鱼Cystatin对成熟OC功能的影响 | 第49-50页 |
| 5.4 利用鲢鱼加工废弃组织Cystatins开发骨生长调节剂的前景展望 | 第50-52页 |
| 6 结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第62页 |
