| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 第一章 绪论 | 第7-13页 |
| 1.1 Ala-Gln概述 | 第7-8页 |
| 1.1.1 Gln与Ala-Gln | 第7页 |
| 1.1.2 Ala-Gln生产 | 第7-8页 |
| 1.2 高产Ala-Gln策略 | 第8-11页 |
| 1.2.1 微生物酶法产Ala-Gln研究进展 | 第8-10页 |
| 1.2.2 pepD/pepN基因作用及其敲除方法 | 第10-11页 |
| 1.3 本课题的研究意义及研究内容 | 第11-13页 |
| 1.3.1 研究意义 | 第11-12页 |
| 1.3.2 研究内容 | 第12-13页 |
| 第二章 材料与方法 | 第13-26页 |
| 2.1 材料 | 第13-15页 |
| 2.1.1 菌种和质粒 | 第13页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第13页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第13-14页 |
| 2.1.4 引物 | 第14-15页 |
| 2.1.5 培养基 | 第15页 |
| 2.1.6 主要溶液 | 第15页 |
| 2.2 菌株构建和培养方法 | 第15-23页 |
| 2.2.1 重组大肠杆菌的培养 | 第15页 |
| 2.2.2 大肠杆菌感受态细胞的制备及其转化 | 第15-16页 |
| 2.2.3 E.coli JM109中pep D基因的敲除 | 第16-18页 |
| 2.2.4 E.coli JM109ΔpepD中pepN基因的敲除 | 第18-21页 |
| 2.2.5 重组大肠杆菌的构建 | 第21-22页 |
| 2.2.6 全细胞催化产Ala-Gln的反应条件 | 第22页 |
| 2.2.7 重组大肠杆菌的发酵优化 | 第22-23页 |
| 2.2.8 重组大肠杆菌 5 L罐发酵实验 | 第23页 |
| 2.3 分析检测方法 | 第23-26页 |
| 2.3.1 重组菌SAET全细胞酶活测定 | 第23-24页 |
| 2.3.2 Ala-Gln的定性分析 | 第24页 |
| 2.3.3 Ala-Gln的浓度分析 | 第24-25页 |
| 2.3.4 葡萄糖含量的测定 | 第25-26页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第26-44页 |
| 3.1 重组大肠杆菌的构建 | 第26-33页 |
| 3.1.1 质粒载体的选择 | 第26-27页 |
| 3.1.2 E.coli JM109中pep D基因的敲除 | 第27-29页 |
| 3.1.3 E.coli JM109ΔpepD中pepN基因的敲除 | 第29-32页 |
| 3.1.4 pepD与pepN缺失对重组菌SAET全细胞酶活的影响 | 第32-33页 |
| 3.2 E.coli JM109ΔpepDΔpepN/pAMP-phoC-SAET摇瓶发酵 | 第33-39页 |
| 3.2.1 重组菌生长曲线及发酵曲线的绘制 | 第33-34页 |
| 3.2.2 单因素优化结果 | 第34-38页 |
| 3.2.3 正交实验结果 | 第38-39页 |
| 3.3 全细胞催化反应条件的优化 | 第39-42页 |
| 3.3.1 反应体系pH的优化 | 第40页 |
| 3.3.2 反应温度的优化 | 第40-41页 |
| 3.3.3 底物配比的优化 | 第41页 |
| 3.3.4 优化后重组菌催化产Ala-Gln的发酵验证 | 第41-42页 |
| 3.4 5L罐发酵实验 | 第42-44页 |
| 主要结论与展望 | 第44-46页 |
| 主要结论 | 第44页 |
| 展望 | 第44-46页 |
| 致谢 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-51页 |
| 附录 | 第51-52页 |
| 附录 1：本文所涉及主要物质标准样品的色谱图 | 第51-52页 |
| 附录 2：作者在硕士期间科研成果 | 第52页 |
